人巨细胞病毒pp65蛋白的原核表达及免疫学特性分析
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[摘 要]目的：应用生物工程方法研制人巨细胞病毒包膜蛋白pp65，并行相应抗体制备的探讨性研究。方法：利用DNA重组技术，以HCMV AD169病毒株基因组为模板，通过PCR克隆HCMV pp65基因。以pET32a(+)为表达载体，构建重组质粒，并在E.Coli(DE3-plys)中诱导表达。然后经柱层析获得纯化蛋白，由蛋白质印迹法验证蛋白的特异性。最后，免疫小鼠获取抗血清，检测抗体产生的效价。结果：重组质粒经测序与Genebank序列一致，转染的细菌能高效表达目的蛋白，纯化后的蛋白能与已知单克隆抗体结合，免疫后的小鼠抗血清能同时识别重组蛋白和病毒抗原。结论：重组表达的HCMV pp65全蛋白经纯化获得较高纯度，且保留良好的免疫原特性。为HCMV感染诊断用单克隆抗体的研制奠定了基础，并为HCMV感染的免疫诊断和治疗提供了新的研究方向。
[关键词]人巨细胞病毒；pp65；表达纯化；蛋白质印迹法；ELISA
[中图分类号]R446.6
[文献标识码]A
[文章编号]1671-7783(2004)06-0479-04
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