重组葡萄糖脱氢酶基因的表达研究

http://www.100md.com 2005年8月1日 周丽萍 姜旭淦 徐顺高 郑铁生 王卉放

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     [摘 要] 目的：将重组的葡萄糖脱氢酶基因在大肠杆菌中表达，优化表达条件，以期获得较高活力的葡萄糖脱氢酶。方法：将枯草芽孢杆菌葡萄糖脱氢酶基因与表达载体pET22b连接后转化至大肠杆菌JM109(DE3)进行表达，经刘发酵时间、诱导物浓度、诱导时间以及细胞破碎等条件的控制，实现葡萄糖脱氢酶的高表达。结果：重组质粒转化菌发酵2h后进入对数生长期，诱导剂IPTC浓度为0.5 mmol/L，诱导2.5～3h后用240W超声破碎细胞，表达的粗提酶活力比诱导前提高于近千倍。SDS-PAGE电泳显示重组菌能表达单体分子量为31.5KD的特异性蛋白。结论：表达质粒的拷贝数、宿主菌培养条件、细胞破碎方式等均能影响酶的表达量。

    [关键词] 葡萄糖脱氢酶；表达；基因

    [中图分类号] Q75；B394.1

    [文献标识码] A

    [文章编号] 1671—7783(2005)04-0291—03

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