胃癌患者外周血Ｔ淋巴细胞及ＮＫ细胞检测的临床意义
 |
| 第1页 |
参见附件(204KB，3页)。
[摘 要] 目的： 探讨胃癌患者外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞的活性检测的临床意义。方法： 采用流式细胞仪测定胃癌患者外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞的活性,以正常人作对照分析。 结果： 胃癌患者外周血CD3+、CD4+、NK细胞数量及CD4+/CD8+比值较正常对照组均明显下降(P<005),而CD8+细胞水平显著升高。外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞数量的改变与胃癌临床病理分期有关,分期越晚,CD3+、CD4+及NK细胞数量CD4+/CD8+细胞比值越低,CD8+细胞水平越高;Ⅰ、Ⅱ期胃癌患者与Ⅲ、Ⅳ期患者之间有显著差异(P<005)。 结论： 检测T淋巴细胞亚群、NK细胞可用于胃癌患者的免疫状态监测。
[关键词] 胃癌; T淋巴细胞亚群; NK细胞
Detection of T Lymphocyte Subset and NK Cell in Peripheral
Blood of Patients with Gastric Cancer
WEN Jiangtao,SUN Lin,LIU Haihong
(1. Department of Clinical Laboratory, the Second People’s Hospital of Lianyungang, Lianyungang Jiangsu 222023;
2. Department of Oncological Laboratory,the First People’s Hospital of Lianyungang, Lianyungang Jiangsu 222002, China)
[Abstract] Objective: To study on the expression and clinical significance of T lymphocyte subset and NK cell activity in the patients with gastric cancer. Methods： Flow cytometry was used to detect the marks of T lymphocyte subsets and NK cells in blood samples from patients with gastric cancer. Data obtained from health people was used as control. Results： Lowers CD3+, CD4+T cells, NK cells and CD4+/CD8+ ratio were detected in blood samples from cancer group than that from the health control (P<005). CD8+T lymphocyte were reverse. This change was related to the TNM pathological stage. Conclusion： The immune function of lymphocytes in peripheral blood of the patients with gastric cancer was low, and even worse in the lower grade of TNM stage. It is valuable for estimating the function of cell immune by detecting T lymphocyte subset and NK cell.
[Key words] Gastric cancer; T lymphocyte subsets; NK cells
胃癌是人体常见的恶性肿瘤,和其他肿瘤一样严重危害人类的健康。据相关文献报道[1,2],肿瘤的发生发展与肿瘤宿主的免疫状态密切相关,细胞免疫在机体的抗肿瘤免疫中占主导地位,研究表明,T淋巴细胞和NK细胞的比例及功能变化与肿瘤的发展、扩散有明显的相关性。我们以正常人外周血为对照,对37例胃癌患者的外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞的活性进行了测定,旨在了解患者免疫功能的变化,并观察其与临床分期的关系,为临床了解胃癌患者的细胞免疫功能、估计预后提供参考。
1 资料与方法
11 研究对象
2005年1～8月在我院门诊及住院治疗的患者37例,均经病理确诊。根据国际新TNM分期标准将胃癌患者进行临床病理分期[3],其中I期2例,II期9例,III期20例,IV期6例。所有病例检测前均未经放疗或化疗。其中男性25例,女性12例,年龄36～78岁,平均(5503±1311)岁。正常对照组30例,为本院健康体检者,其中男性18例,女性12例,年龄32～58岁,平均(4838±1358)岁。所有受检对象均无免疫系统疾病或使用过免疫抑制剂。
12 试剂和仪器
单克隆抗体抗CD3FITC、抗CD4PE、抗CD8PE及CD16+56PE,均由美国Becton Dickinson 公司生产,CD3+、CD4+、CD8+、CD16+56+分别代表总T、TH、TS、NK细胞。红细胞裂解液由BD公司生产。FACSCan流式细胞仪为美国Becton Dickinson 公司产品。
13 检测方法
取肝素抗凝的新鲜外周血100 μl,加入上述单抗20 μl,混匀,室温避光20 min染色;加入15 ml红细胞裂解液,混匀后室温避光放置10 min,破坏红细胞;1 500 r/min离心5 min,弃上清;每管加入2 ml 01%叠氮钠的磷酸盐缓冲液混匀,1 000 r/min离心5 min,弃上清;加PBS 1 ml,混匀,2 h内上机检测。采用FACSCan型流式细胞仪CellQuest软件获取与分析数据。以FSCH/SSCH设定淋巴细胞门,IgG/FITC/IgG2aPE确定FL1和FL2的非特异性结合水平,同时调节FSC、SSC电压,FSC阈值,FL1FL2%、FL2FL1%荧光补偿。每管获取1万个细胞。
14 统计学处理
数据以±s表示,用MINITAB统计软件进行统计学处理。
2 结 果
与正常对照组比较,胃癌各期患者CD3+细胞、CD4+细胞、CD4+/CD8+细胞比值及NK细胞数量均显著降低(P<005),而CD8+细胞值则显著升高(P<005),尤其是IV期患者差异更为显著(P<001)。Ⅰ期～Ⅳ期胃癌患者,CD3+细胞、CD4+细胞、CD4+/CD8+细胞比值及NK细胞数量逐渐下降,CD8+细胞水平逐渐升高,其中Ⅰ、Ⅱ期胃癌患者之间以及Ⅲ、Ⅳ期胃癌患者之间比较无显著差异(P>005)。但Ⅲ、Ⅳ期胃癌患者CD3+细胞、CD4+细胞、CD4+/CD8+细胞比值及NK细胞数较Ⅰ、Ⅱ期显著下降(P<005),而CD8+细胞水平显著升高(P<005)。见表1。表1 胃癌患者及对照组外周血T淋巴细胞亚群及NK细胞数量
3 讨 论
机体的免疫系统是在生物进化中逐步建立起来的,其存在与功能的正常建立在机体稳定性的基础上。在正常情况下,机体的自身免疫功能可以防御病原微生物的侵袭,消除体内损伤或变老的自身细胞,处理体内出现的少量异常细胞。当人体的免疫监视功能失调时,常可导致肿瘤的发生、发展。肿瘤的发生、发展与人体的免疫功能密切相关,特别与T淋巴细胞功能的关系更密切[4]。T细胞的免疫调节作用主要由CD4+、CD8+完成,CD4+协调B细胞分化产生抗体,CD8+则抑制抗体的合成、分泌及T细胞的增殖,两者的稳态维持着机体正常的免疫应答。本研究结果显示,胃癌患者外周血CD3+细胞、CD4+细胞、CD4+/CD8+细胞比值均明显低于正常人,而CD8+细胞则明显高于正常人,与文献报道一致[5],说明胃癌患者免疫功能较正常人明显低下,其机制可能与肿瘤在发生、发展过程中分泌大量的免疫抑制因子(TDSF)有关[6],TDSF可广泛抑制杀伤细胞的活性,同时在肿瘤抗原的刺激下,脾细胞免疫抑制细胞前体被激活,分泌免疫抑制因子,从而导致胃癌患者免疫功能低下。由于这种免疫抑制是肿瘤源性的,因此表现为患者的免疫状态与病情呈显著的负相关,在本研究中,随着胃癌患者病情的发展,由Ⅰ期至Ⅳ期机体外周血细胞免疫功能逐渐下降,Ⅰ、Ⅱ期与Ⅲ、Ⅳ期患者之间有显著性差异,提示胃癌患者免疫状态与TNM分期呈负相关,患者的病期越晚,免疫状态越差,反之,患者的免疫功能越低下,提示病期越晚、预后越差。故患者的免疫状态可间接提示患者预后。
据文献报道[7],NK细胞是在肿瘤早期发挥作用的效应细胞,不需要预先接触抗原,无MHC限制性,不依赖抗体或补体即可直接杀伤MHCI类分子表达低下或缺如的肿瘤细胞,被称为抵抗肿瘤生长的第一道防线,其表面标志是CD16+CD56+,本研究结果显示,胃癌患者NK细胞数量明显低于对照组,且与TNM分期有关,TNM分期越晚,NK细胞数量越低,其原因可能是在杀伤肿瘤细胞的过程中消耗了大量的NK细胞,肿瘤细胞分泌的TDSF使NK活性降低,NK细胞在血液循环中再分布等。
本文研究结果进一步证实了胃癌患者细胞免疫功能降低,即机体抗肿瘤免疫功能低下,导致肿瘤细胞逃避了免疫监视持续生长,因此,应用流式细胞仪检测外周血T淋巴细胞和NK细胞等指标可用于胃癌患者的免疫状态监测,对胃癌患者的免疫辅助治疗应着重围绕提高CD3+细胞、CD4+细胞及NK细胞的数量和功能,提高患者免疫功能。对于胃癌患者T淋巴细胞变化规律、发生机制以及作为判定肿瘤患者预后指标的临床意义,还需要进一步研究。
[参考文献]
[1] Lissni P, Brivio F, Ferranle R, et al. Circulating immature and mature dendritic cells in relation to lymphocyte subsets in patients with gastrointestinal tract cancer [J]. Int J Biol Markets, 2002,12 (1): 22-25.
[2] Decensi A, Costa A. Recent advances in cancer chemoprevention with emphasis on breast and cancer [J]. Eur J Cancer, 2002, 3 (6): 694-709.
[3] Kennedy BJ. T unified international gastric cancer staging classification system [J]. Scand J Gastroenterol, 1987, 22 (Suppl 133): 11.
[4] Kuss I, Hathway B, Ferris RL, et al. Decreased absolute counts of T lymphocyte subsets and their relation to disease in squamous cell carcinoma of the head and neck [J]. Clin Cancer Res, 2004, 10 (11): 3755-3762.
[5] 石 彦,余佩武,雷 晓,等.胃癌患者外周血淋巴细胞免疫功能的研究[J].重庆医学,2004,33(2):229-231.
[6] 朱金水,蒋西华,徐家裕,等.人胃癌细胞产生免疫抑制因子作用研究[J].中国免疫学杂志,1998,14(3):201-203.
[7] 汤钊酋. 现代肿瘤学[M]. 上海:上海医科大学出版社,1993:129-132.
(1.连云港市第二人民医院检验科， 江苏 连云港 222023; 2.连云港市第一人民医院肿瘤实验室， 江苏 连云港 222002)
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件(204KB，3页)。