生长抑素2型受体在上皮性卵巢肿瘤中的表达及其与凋亡的相关性
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作者简介：邢兰瑛(1953)，女(汉族)，学士，副教授，主要从事妇科肿瘤的研究
摘要：目的 检测卵巢癌组织中的细胞凋亡情况，探讨细胞凋亡与生长抑素2型受体(SSTR2)表达的相关性。方法 采用链霉素亲生物素过氧化物酶法(SP法)进行免疫组织化学染色，SSTR2阳性染色为棕黄色颗粒，定位于细胞膜及细胞浆；采用TUNEL试剂盒检测凋亡细胞，胞核中有棕黄色颗粒散在分布者为阳性细胞。均根据阳性细胞的比例判定结果。结果 经统计学处理表明，SSTR2的表达与卵巢肿瘤的病理类型、组织学分级、有无腹水等有显著相关性(P<0.05)，上皮性卵巢癌组织中细胞凋亡和SSTR2表达呈正相关(r=0.895，P<0.05)。结论 卵巢癌组织细胞中SSTR2的表达可能参与细胞凋亡的调节机制，在卵巢上皮性肿瘤恶变的过程中发挥作用，并与恶性程度关系密切，有可能成为卵巢癌预后评估的参考指标。
关键词：卵巢肿瘤；生长抑素2型受体；免疫组织化学；凋亡
Expression of somatostatin receptorⅡ and its correlation with cell apoptosis in epithelial ovarian tumorXing Lanying, Liu Xing, Shi Yuxia, Cai Dongge, Wang Rong
(Department of Gynecology and Obstetrics, the Second Affiliated Hospital, Medical School of Xian Jiaotong University, Xian 710004, China)
ABSTRACT: Objective To analyze the correlation of SSTR2 and cell apoptosis. Methods The expression of SSTR2 was detected by immunohistochemistry.The positive cells had brown grains which were situated in the theca and plasm of the cells. The condition of cell apoptosis was studied with TdT mediated dUTP nick end labeling(TUNEL) method, and the positive cells had brown grains which were situated in the nucleus. Results The expression of somatostatin receptorⅡ had marked correlation (P<0.05) with pathologic grade, histological type and the ascites of ovarian tumor. The positive correlation had been observed between SSTR2 expression and cell apoptosis (r=0.895, P<0.05). Conclusion There is positive correlation between the expression of SSTR2 and cell apoptosis in epithelial ovarian tumor. SSTR2 may participate in the regulating cell apoptosis and may perform function in malignance.
KEY WORDS: ovarian tumor; somatostatin receptor2; immunohistochemistry; apoptosis
生长抑素(somatostatin, SST)是人体内广泛分布的一种激素，在体内有着多种生物学活性。由于天然SST在体内的半衰期比较短(约3min)，故有许多人工合成的类似物，以选择性增强和延长某种生物学活性。近年来，SST及其类似物(somatostatin analog, SSA)对肿瘤细胞的抑制作用已越来越引起人们的关注。大量证据表明，SSA不仅能抑制绝大多数具有神经内分泌功能肿瘤的增殖，而且对普通的实体瘤也具有生长抑制作用。研究发现, SSA的生物学活性是通过5种不同的生长抑素受体介导的。在卵巢肿瘤组织中亦存在着SST2型受体(somatostatin receptorⅡ, SSTR2)的表达,SSA对于卵巢肿瘤细胞具有明显的抑制作用。本研究通过检测卵巢上皮性肿瘤组织及细胞中SSTR2的表达情况，并探讨其与细胞凋亡的关系，以期为SSA应用于卵巢癌的临床治疗提供可能性依据。
1 材料与方法
1.1 材料 收集2000年2月至2004年2月在西安交通大学医学院第二附属医院妇产科住院患者手术切除的卵巢恶性肿瘤标本31例，依据WHO组织学分类，浆液性囊腺癌16例，黏液性囊腺癌15例；临床分期Ⅰ期、Ⅱ期归入早期共17例，Ⅲ期、Ⅳ期归入晚期共14例；组织学分级Ⅰ级13例，Ⅱ级15例，Ⅲ级3例；有腹水者12例，无腹水者19例。患者平均年龄(55±10)岁。
1.2 TUNEL染色及结果判定 TUNEL试剂盒由武汉博士德生物工程公司提供，按试剂盒说明书进行染色与检测。阳性细胞判定标准为细胞散在分布，胞核中有棕黄色颗粒散在分布。每张切片随机选取5个高倍视野(×400倍) ，每个视野计数200个细胞，总计1000个，凋亡细胞<5%为阴性(-)，>5%为阳性(+)。
1.3 免疫组织化学染色及结果判定 鼠抗人SSTR2多克隆抗体(工作浓度1∶100)购于武汉博士德生物工程公司，按试剂盒说明书进行染色与检测。SSTR2阳性染色为棕黄色颗粒，定位于细胞膜及细胞浆。结果判定标准：每张切片随机选择10个高倍视野，根据阳性细胞的比例判定，不着色或弱阳性细胞<20%为(-)；阳性细胞 20%-50%定为弱阳性(+)；阳性细胞50%-75%定为阳性()，大于75%定为强阳性()。
1.4 统计学处理 所有资料均经SPSS11.5软件处理，采用χ2检验、校正χ2检验以及Spearman相关性分析，以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结 果
2.1 免疫组化染色结果 SP染色结果表明，SSTR2的表达与肿瘤的组织学分级、有无腹水等有显著相关性(P<0.05)。从本组资料可以看出：①浆液性卵巢癌组织比黏液性卵巢癌组织中SSTR2的表达高，但经统计学分析两组间无显著性差异(P>0.05)；②卵巢癌恶性程度越高，SSTR2表达越高，低分化卵巢癌细胞受体阳性表达率明显高于高分化卵巢癌细胞(P<0.05)；③随着卵巢癌病变进展，肿瘤细胞膜及细胞浆SSTR2表达增强，Ⅲ、Ⅳ期肿瘤细胞受体阳性表达率明显高于Ⅰ、Ⅱ期肿瘤细胞(P<0.05)；④SSTR2表达在有腹水组明显高于无腹水组(P<0.05)。
2.2 TUNEL法检测结果 在31例上皮性卵巢癌组织中，细胞凋亡阳性者18例，阳性率58.1%，凋亡细胞呈灶状分布，无明显规律。SSTR2阳性表达率为45.16% (14/31)，同时有细胞凋亡和SSTR2阳性表达者10例，占32.25%。
2.3 相关性分析 Spearman相关性分析显示，上皮性卵巢癌组织中细胞凋亡和SSTR2表达之间呈正相关(r=0.895，P<0.05，表1)。表1 上皮性卵巢癌组织中SSTR2的表达与细胞凋亡(略)
3 讨 论
本研究结果表明，随着卵巢癌恶性程度的增加和病变的进展，肿瘤细胞表面的SSTR2表达增强，在恶性程度高的肿瘤中SSTR2表达相对增高，其间有统计学意义(P<0.05)。其原因暂时不清，可能的解释为：①卵巢癌起源于原始体腔上皮细胞，这种细胞具有多能分化的潜质，在不同的条件下细胞的恶性转化会有所不同，而SSTR2表达的差异可能是细胞恶性程度不同的表现之一；②癌细胞刺激机体合成其受体，对恶性肿瘤的发生、发展产生自身抑制的结果；③卵巢癌中SSTR2表达率较低，本组31例卵巢癌中仅有14例呈阳性表达，可能与本研究样本量偏少有关，有待增大样本数来进一步核实。张永健等采用放射受体结合分析方法分析了乳腺正常组织、癌旁组织和乳腺癌组织中SSTR2表达，结果发现乳腺癌组受体表达率最高，与对照组比有显著性差异(P<0.01)，提示乳腺癌在发生发展过程中伴随着SSTR2的高度表达。而陈怀增等采用RTPCR方法在卵巢上皮性癌标本及其细胞株中研究了SSTR2表达，认为随着肿瘤病变的进展，SSTR2的表达出现下调和丢失现象。不同类型的肿瘤其细胞表面受体出现不同类型的表达模式，有待于进一步研究。
现已证明，有一些基因能够调控细胞凋亡，这些基因大致分为两类:细胞凋亡的抑制基因和细胞凋亡的诱导基因。恶性肿瘤的发生可以归纳为以下假设：细胞调亡的诱导基因失活或细胞凋亡的抑制基因过度表达与有利于细胞增殖的基因突变偶联，细胞死亡率降低，过度增殖，造成细胞数量失控，从而发生恶性肿瘤。
SSTR2的mRNA可在大多数人类肿瘤组织中被发现，其具有介导SST及其类似物抗增殖作用，并诱导细胞凋亡。目前临床上作为诊断和治疗目的而应用的SST及其类似物都选择性地与SSTR2有高度结合力。本实验应用TUNEL法检测发现，卵巢癌组织可见灶状细胞凋亡，分布无明显规律性，提示细胞凋亡在卵巢癌发生发展过程中起一定作用。用免疫组化法发现，SSTR2阳性表达率为45.16%，卵巢癌组织细胞中SSTR2的表达与凋亡细胞分布区域无一定规律，但经统计学分析其表达与凋亡呈正相关。同时有细胞凋亡和SSTR2阳性表达者占32.25%，提示SSTR2可能通过调控细胞凋亡而参与卵巢癌的发生与发展。在卵巢浆液性囊腺癌和卵巢黏液性囊腺癌之间，细胞凋亡和SSTR2表达阳性率差异无显著性，提示卵巢癌虽然型别不同，但细胞凋亡可能是不同类型卵巢癌的相同发生发展机制之一；亦提示细胞凋亡及SSTR2的表达与卵巢上皮性肿瘤的类型无关，但对卵巢癌的预后评估可能有一定意义。
肿瘤组织的SSTR2密度和对SST及其类似物的亲和力远高于正常组织，利用放射性同位素标记生长抑素及其类似物，以生长抑素为载体，通过受体显像技术，使放射性同位素浓聚于高表达SSTR的肿瘤区域，这将有助于肿瘤及其转移灶的定位诊断。
有报道，利用111InDTPAoctreotide进行受体显像，对SSTR阳性肿瘤诊断的敏感性高达61%-100%。恶性卵巢肿瘤具有易转移和易复发的特点，有学者认为，利用放射性核素标记生长抑素进行受体显像分析，将有助于提高对复发性和转移性生长抑素受体阳性的卵巢肿瘤检测的敏感性。Plonowski等认为，利用细胞毒性生长抑素类似物行靶向化疗可能使那些有SSTR表达的晚期恶性卵巢肿瘤患者从中得益。除靶向化疗外，生长抑素类似物也可用于卵巢肿瘤的靶向放疗。
Chaudhuri等则以腺病毒为载体将Ⅱ型生长抑素受体基因(AdSSTR2)转染至上皮性卵巢癌细胞株SKOV3，并利用99mTcP2045行受体显像以观察转染后的SKOV3细胞生长抑素受体的表达状况，发现利用此方法在体内外均可诱使卵巢癌细胞表达Ⅱ型生长抑素受体。其研究表明，对于那些没有生长抑素受体表达或表达含量很低的卵巢肿瘤细胞，可利用基因治疗的手段诱导其表达高含量的生长抑素受体，从而为利用生长抑素类似物诊断与治疗卵巢肿瘤提供了可能。
SSA具有不良反应小、血浆半衰期长及使用方便等优点。初步研究发现在卵巢肿瘤组织中存在着SSTR2的表达，在体外研究及动物实验中已发现SSA对卵巢肿瘤细胞具有明显的抑制作用，在卵巢肿瘤的靶向化疗和基因治疗等方面也显示了诱人的前景。我们相信随着研究的深入、大规模临床试验的进行以及更为有效的SSA的成功开发，将会为卵巢肿瘤的诊断与治疗开辟一条新的途径。
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西安交通大学医学院第二附属医院妇产科，陕西西安 710004
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