熊果酸对大鼠子宫平滑肌收缩的影响
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摘要：目的 观察熊果酸对离体大鼠子宫活动的影响。方法 将离体子宫肌条在1g的前负荷下温育，加入熊果酸1.0×10-8、2.0×10-8、3.0×10-8 、4.0×10-8g/L，以等容量生理盐水作为自身对照，记录30min；分别使用不同的受体拮抗剂5min后，再加入熊果酸3.0×10-8g/L。用Biolap 410生物机能仪记录熊果酸对离体子宫平滑肌运动的影响。结果 熊果酸可增强离体子宫平滑肌的收缩振幅、频率和持续时间，熊果酸剂量与子宫肌兴奋作用存在剂量反应关系。并使用受体阻断剂苯海拉明(2×10-6mol/L)、酚妥拉明(2×10-6mol/L)、异博定(2×10-7mol/L)及消炎痛(2×10-5mol/L)观察其改变。该增强作用可被消炎痛阻断，而异博定、酚妥拉明、苯海拉明未能阻断熊果酸的作用。结论 熊果酸增强作用与前列腺素酶的合成与释放有关，不通过L型电压依赖性钙通道、α受体以及H1受体发挥作用。
关键词：熊果酸；子宫；平滑肌
Effect of ursolicacid on contractile activity of uterine smooth muscle strips of virginal rats
Ma Liyang, Li Zhiqiang, Xu Jingdong
(Department of Physiology, Northwest Nationalities University, Lanzhou 730000; Department of Physiology, Capital University of Medical Science, Beijing 100069, China)
ABSTRACT: Objecitve To observe the effects of ursolicacid on contractile activity of uterine smooth muscle strips of virginal rats. Methods 20 Wistar virginal rats, weight 200-300g were selected, to record the effects of ursolicacid (1.0×10-8, 2.0×10-8, 3.0×10-8, 4.0×10-8g/L) on contractile activity of uterine smooth muscle strips with Biolap 410 Biological System. Diphenhydramine (2×10-6mol/L), Phentolamine (2×10-6mol/L), Verapamil(2×10-7mol/L), Indomethacin (2×10-5mol/L) were used as antagonists to study the mechanisms of ursolicacid on uterine smooth muscle strips. Results Ursolicacid could significantly potentiate uterine contractile activity of virginal rats. It could increase the frequencies, prolong the duration and enlarge the amplitude of contractile activity. The effect of which could be inhibited by the Indomethacin; but could not restrained by other antagonists. Conclusion The results of Ursolicacid may be mainly primarily with prostaglandin synthese or release, but not mediated by H1 receptor, α receptor and Lvoltagedependant calcium channels.
KEY WORDS: ursolicacid; uterine; smooth muscle
熊果酸(ursolicacid)又名乌索酸、乌苏酸，属三萜类化合物，相对分子质量为456，在自然界分布很广，存在于杜鹃花科植物熊果的叶、果实，玄参植物毛泡桐的叶，茜草科植物栀子的果实，龙胆科植物湿生蕾，木樨科植物女贞的叶，紫威科植物毛子草的地上部分。熊果酸具有广泛的生物学效应，其突出作用为抗肿瘤，它对多种致癌、促癌物有抵抗作用，且对多种恶性肿瘤细胞有明显细胞毒作用和诱导分化及抗血管形成作用，其防癌抗癌作用已引起重视[1]。熊果酸对离体平滑肌运动影响及机制的研究鲜见报道。
1 材料与方法
1.1 材料 熊果酸购自中国药品生物制品鉴定所(编号7428902)，配制成浓度为4×10-6g/L，备用。肌肉张力换能器(JH2，中国北京航天医学工程研究所)、Biolap 410生物机能实验系统(成都泰盟电子有限公司研制)、CW3恒温平滑肌槽(上海豪敦工贸有限公司医学·生物学实验器件厂)、950mL/L O2与50mL/L CO2组成的标准气体(中科院兰州化学物理研究所特种气体供应站)。受体阻断剂分别为消炎痛(2×10-5mol/L)、酚妥拉明(2×10-6mol/L)、异搏定(2×10-7mol/L)和苯海拉明(2×10-6mol/L)。
1.2 方法 成年未孕Wistar大鼠20只，体重250-300g，由兰州医学院实验动物室提供(合格证书：医动字第3676494号)。动物实验前24h禁食，饮水不限，并于实验前72h皮下注射乙烯雌酚0.5mg/kg，造成人工动情期以提高子宫对药物的敏感性。猛击大鼠头部致昏，取卵巢及子宫分叉处之间的中段子宫，剪除周围组织，沿系膜纵轴剖开子宫角，在Krebs缓冲液中漂洗干净。将其平铺固定在盛有石蜡的培养皿中，将培养皿中充满Krebs液，并持续供给950mL/L O2和50mL/L CO2标准气体。在石蜡盘中，用固定的两片平行刀片沿平滑肌纤维的方向取宽2mm的纵行肌条，用大头针将肌条的两端固定，以肌条平展为宜，内膜面朝上，用眼科弯剪刀剪除内膜层，用手术缝线将肌条扎紧打结，另一端打结后再结一个直径约0.5cm的环。扎线后的肌条长约5-8mm。将肌条分别安置在恒温平滑肌肌槽中，每个肌槽中分别盛有5mL 37℃ Krebs液。肌条在1g的前负荷下温育，每20min更换一次5mL新鲜的Krebs液(37℃)，待肌条的自发活动平稳后再加入1.0×10-8、2.0×10-8、3.0×10-8、4.0×10-8g/L熊果酸，记录子宫平滑肌收缩情况。加入α受体拮抗剂酚妥 拉明(2×10-6mol/L)5min后，再加入熊果酸(3.0×10-8g/L)观察20min子宫平滑肌肌条收缩的振幅、频率、收缩的持续时间。此后，用37℃ Krebs液冲洗多次。待肌条的自发活动平稳后，依次使用H1受体阻断剂苯海拉明(2×10-6mol/L)、L型电压依赖性钙通道阻断剂异搏定(2×10-7mol/L)及前列腺素合成酶抑制剂消炎痛(2×10-5mol/L)。药物终浓度指的是溶于肌槽中5mL溶液后的浓度。
1.3 统计学方法 所有数据均采用均数±标准差(±s)表示。使用SPSS 8.0软件进行统计学检验，给药组与对照组之间采用配对t检验。
2 结果
随着熊果酸的剂量增加，子宫出现收缩频率、收缩幅度增加，持续时间延长，使子宫肌张力增加，最后出现强直性收缩，熊果酸的剂量与子宫的兴奋作用呈正相关(r=0.9587, P<0.05)(表1，图1)。熊果酸(3.0×10–8g/L)的作用可被消炎痛(前列腺素合成酶抑制剂)所阻断，说明熊果酸是通过作用前列腺素合成酶而对大鼠子宫平滑肌起作用，而使用H1受体阻断剂苯海拉明、α受体阻断剂酚妥拉明以及L型电压依赖性钙通道阻断剂异博定后，熊果酸增强子宫平滑肌的作用未被阻断(表2)，说明该作用可能与H1受体、α受体及L型电压依赖性钙通道无关。
表1 熊果酸对未孕大鼠离体子宫平滑肌收缩的影响(略)
Table 1 The effect of Ursolicacid on contractile activity of uterine smooth muscle strips of virginal rats
*P<0.05, **P<0.01 vs. control
表2 几种拮抗剂对熊果酸增强未孕大鼠子宫平滑肌条运动的影响(略)
Table 2 Effect of antagonists on the contractile activity of Ursolicacid on uterine smooth muscle strips of virginal rats
*P<0.05, **P<0.01 vs. control; △P<0.05, △△P<0.01 vs. Ursolicacid
Ursolicacid (U): 3.0×10-8g/L; Indomethacin: 2×10-5mol/L; Phentolamine: 2×10-6mol/L; Verapamil: 2×10-7mol/L;
Diphenhydramine: 2×10-6mol/L.
图1 熊果酸对子宫平滑肌收缩频率和振幅的量效曲线(略)
Fig.1 Amplitude and frequency doseeffect curve of Ursolicacid on uterine smooth muscle strips (n=15)
3 讨论
熊果酸又名乌索酸、乌苏酸。熊果酸在植物界分布较广，据不完全统计，在自然界已有34科108种植物中分离得到熊果酸。主要分布在女贞子、山楂、夏枯草和山茱萸等植物中。属于α香树脂醇五环三萜类化合物，从中草药中提取分离得到。有研究表明熊果酸具有广泛的生物学效应，包括抗炎止咳、抗糖尿病、抗脂质过氧化、抗抑郁等，尤其是在抗肿瘤、抗氧化、保肝、降血脂方面作用显著。因其明显的抗氧化功能，而被广泛地用作医药和化妆品原料。熊果酸的药理作用广泛，不良反应少，毒性低，近年来对其提取、含量测定、药理作用方面进行了大量的研究工作[13]。本实验发现，熊果酸对未孕大鼠子宫平滑肌有显著的增强作用，能增加收缩频率、振幅、持续时间以及面积(振幅×持续时间)，而且有明显的正相剂量效应，对子宫平滑肌收缩作用可被消炎痛(前列腺素合成酶抑制剂)所阻断。这说明熊果酸是通过作用前列腺素合成酶而对大鼠子宫平滑肌起作用，即熊果酸增强子宫平滑肌的运动与前列腺素酶的合成与释放有关，而与H1受体、α受体以及L型电压依赖性钙通道无关。
参考文献：
[1]李开泉，陈武，熊筱娟，等. 乌索酸的化学、药理及临床应用进展 [J]. 中成药, 2002, 24(9):709711.
[2]熊斌，雷志勇，陈虹.熊果酸药理学的研究进展 [J]. 国外医学药学分册, 2004, 31(3):133136.
[3]殷晓东，赵浩如.熊果酸研究进展 [J]. 中华实用中西医杂志, 2004, 24(4):38303830.
(编辑 邱 芬)
基金项目：国家民委自然科学基金资助项目(2002127)
(西北民族大学医学院生理学教研室，甘肃兰州 730000；首都医科大学基础医学院生理学教研室，北京 100069)
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