乙肝患者HBV感染指标、病毒复制水平与基因分型关系探究
【摘要】目的：研究乙肝患者HBV感染指标、病毒复制水平与基因分型的关系。方法：选择？？例乙型肝炎患者作为研究对象，根据病毒基因分型不同分为B型组和C型组，检测两组患者的HBV-DNA载量、ATL和AST含量以及细胞免疫功能。结果：C型组患者的HBV-DNA病毒载量高于B型组，ATL和AST含量高于B型组；外周血中CD4+T细胞含量以及CD4+/CD8+T细胞比值低于B型组。结论：C基因型病毒感染乙肝患者的整体病情比B基因型感染患者严重，表现为HBV-DNA载量更高、肝细胞损伤和免疫功能损伤更严重。
【关键词】乙型肝炎；基因分型；转氨酶；T细胞亚群
【中图分类号】R4 【文献标识码】B 【文章编号】1671-8801(2015)04-0078-02
慢性乙型肝炎是我国最常见的传染性疾病，由乙型肝炎病毒(HBV)感染造成。近年来有研究认为，HBV-DNA可以分为A-H八种基因型，不同基因型的感染能力不同，感染机体后造成肝细胞损伤的程度也不同[1]。在下列研究中，我们分析了乙肝患者HBV感染指标、病毒复制水平与基因分型的关系。
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1、对象与方法
1.1 对象
选择在我院确诊为乙型肝炎的80例患者作为研究对象，所有患者均为首次诊断且未接受抗病毒和免疫治疗，设计特异性引物序列并进行PCR扩张，根据结果判断HBV-DNA的分析，根据分型不同分为B型组和C型组。B型组共45例，包括男性/女性：28/17例，年龄57.79±6.92岁；C型组共35例，包括男性/女性：22/13例，年龄58.11±6.78岁。两组患者一般资料的比较无差异(P>0.05)。
1.2 方法
1.2.1 检测样本采集方法
两组患者均在清晨空腹状态下采集外周静脉血并分为两份，一份离心后取血清，另一方直接保存为抗凝血。
1.2.2 HBV-DNA载量
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采用DNA提取分离试剂盒抽提血清样本中的乙肝病毒DNA，而后进行PCR扩增，根据扩增曲线计算DNA拷贝数。
1.2.3 转氨酶含量
采用电化学发光仪检测血清样本中丙氨酸氨基转移酶ALT、天门冬氨酸氨基转移酶AST的含量。
1.2.4 T细胞亚群
取抗凝血，分别加入CD4、CD8亚群表面标志性物质的单克隆抗体进行孵育，而后在流式细胞仪上检测并计算不同T细胞亚群所占比例。
1.2.5 统计学方法
采用SPSS19.0软件对检测所得数据进行录入，对两组间差异进行t检验，按照P<0.05判断组间有差异。
2、结果
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2.1 HBV-DNA载量
C型组患者的HBV-DNA拷贝数(4.85±0.56)lgcopies/mL，高于B型组患者的HBV-DNA拷贝数(2.91±0.34)lgcopies/mL，t=7.029、p<0.05。
2.2 转氨酶含量
C型组患者的ALT(121.23±15.62)U/L、AST(140.94±17.20)U/L，均高于B型组患者的ALT(87.49±10.08)U/L、AST(91.31±11.45)U/L，t值分别为6.884、6.391，p均<0.05。
2.3 T淋巴细胞亚群含量
C型组患者的CD8+T细胞亚群含量(21.45±3.34)%，与B型组患者的CD8+T细胞亚群含量(22.18±3.19)%比较，无显著差异(P>0.05)。
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C型组患者的CD4+T细胞亚群含量(29.24±3.95)%、CD4+/CD8+比例(1.36±0.17)，低于B型组患者的CD4+T细胞亚群含量(37.71±4.86)%，CD4+/CD8+比例(1.70±0.21)，t值分别为6.019、5.866，p均<0.05。
3、讨论
HBV中S基因的全序列与人体全基因组序列保持了高度的一致性，根据S基因序列的差异可以将HBV分为A-H八种不同的基因型，在我国以B型和C型最为常见，北方人群以HBV-C基因型为主，而南方则以HBV-B基因型为主、C基因型也占到一定比例。近年来的研究认识到，不同基因型HBV对机体的感染能力不同，这也是导致乙型肝炎患者病变程度不一致的内在原因[2]。
HBV感染机体后最突出的表现在于病毒DNA自身不断复制并对正常肝细胞进行攻击。HBV的自身复制能力越强，体内DNA载量也越高，进而会导致肝细胞损伤加重。因此，检测HBV-DNA的拷贝数能够准确反应病毒的感染能力。本研究的分析结果显示，C型组患者的HBV-DNA病毒载量高于B型组。这就初步提示C基因型HBV在感染肝细胞后的复制能力较强，可能会造成肝细胞更严重的损害。
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肝细胞内含有丰富的转氨酶并参与机体内多种物质的代谢，当细胞受到HBV的攻击后会发生破裂并导致胞浆内的转氨酶释放入血。丙氨酸氨基转移酶ALT、天门冬氨酸氨基转移酶AST是反应肝细胞损伤程度最常用的两种转氨酶。本研究通过分析血清中转氨酶的含量可知，C型组患者血清ATL和AST含量高于B型组，由此说明C基因型HBV对肝细胞的损伤程度较重，这也与C基因型HBV复制能力较强的结果相吻合。
机体免疫功能是清除HBV的主要机制，其中T细胞所介导的细胞毒效应对于抵抗病毒入侵、清除HBV具有重要作用。CD4+T淋巴细胞是细胞免疫的执行者，能够分泌多种细胞因子来促进免疫细胞成熟、具有明确的抗病毒作用；CD8+的功能是通过细胞溶解作用来清除病毒，但同时也具有一定的免疫抑制效应。HBV感染会造成免疫功能损伤，本研究分析通过分析免疫功能指标可知，C型组患者外周血中CD4+T细胞含量以及CD4+/CD8+T细胞比值低于B型组，这就说明C基因型HBV感染对机体免疫功能的损伤较大。
综合以上讨论我们总结如下：C基因型病毒感染乙肝患者的整体病情比B基因型感染患者严重，表现为HBV-DNA载量更高、肝细胞损伤和免疫功能损伤更严重。
参考文献
[1]林娟娟，张宝华. 慢性乙型肝炎患者感染的病毒基因分型与部分肝功能指标分析[J]. 检验医学与临床，2014，11(9)：1256-1257.
[2]钟大妮，李国坚，吴继周，等. 广西地区乙肝病毒基因分型与临床表现及机体免疫功能关系的研究[J]. 中国医学创新，2013，10(2)：1-3., 百拇医药(武欣越)
【关键词】乙型肝炎；基因分型；转氨酶；T细胞亚群
【中图分类号】R4 【文献标识码】B 【文章编号】1671-8801(2015)04-0078-02
慢性乙型肝炎是我国最常见的传染性疾病，由乙型肝炎病毒(HBV)感染造成。近年来有研究认为，HBV-DNA可以分为A-H八种基因型，不同基因型的感染能力不同，感染机体后造成肝细胞损伤的程度也不同[1]。在下列研究中，我们分析了乙肝患者HBV感染指标、病毒复制水平与基因分型的关系。
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1、对象与方法
1.1 对象
选择在我院确诊为乙型肝炎的80例患者作为研究对象，所有患者均为首次诊断且未接受抗病毒和免疫治疗，设计特异性引物序列并进行PCR扩张，根据结果判断HBV-DNA的分析，根据分型不同分为B型组和C型组。B型组共45例，包括男性/女性：28/17例，年龄57.79±6.92岁；C型组共35例，包括男性/女性：22/13例，年龄58.11±6.78岁。两组患者一般资料的比较无差异(P>0.05)。
1.2 方法
1.2.1 检测样本采集方法
两组患者均在清晨空腹状态下采集外周静脉血并分为两份，一份离心后取血清，另一方直接保存为抗凝血。
1.2.2 HBV-DNA载量
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采用DNA提取分离试剂盒抽提血清样本中的乙肝病毒DNA，而后进行PCR扩增，根据扩增曲线计算DNA拷贝数。
1.2.3 转氨酶含量
采用电化学发光仪检测血清样本中丙氨酸氨基转移酶ALT、天门冬氨酸氨基转移酶AST的含量。
1.2.4 T细胞亚群
取抗凝血，分别加入CD4、CD8亚群表面标志性物质的单克隆抗体进行孵育，而后在流式细胞仪上检测并计算不同T细胞亚群所占比例。
1.2.5 统计学方法
采用SPSS19.0软件对检测所得数据进行录入，对两组间差异进行t检验，按照P<0.05判断组间有差异。
2、结果
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2.1 HBV-DNA载量
C型组患者的HBV-DNA拷贝数(4.85±0.56)lgcopies/mL，高于B型组患者的HBV-DNA拷贝数(2.91±0.34)lgcopies/mL，t=7.029、p<0.05。
2.2 转氨酶含量
C型组患者的ALT(121.23±15.62)U/L、AST(140.94±17.20)U/L，均高于B型组患者的ALT(87.49±10.08)U/L、AST(91.31±11.45)U/L，t值分别为6.884、6.391，p均<0.05。
2.3 T淋巴细胞亚群含量
C型组患者的CD8+T细胞亚群含量(21.45±3.34)%，与B型组患者的CD8+T细胞亚群含量(22.18±3.19)%比较，无显著差异(P>0.05)。
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C型组患者的CD4+T细胞亚群含量(29.24±3.95)%、CD4+/CD8+比例(1.36±0.17)，低于B型组患者的CD4+T细胞亚群含量(37.71±4.86)%，CD4+/CD8+比例(1.70±0.21)，t值分别为6.019、5.866，p均<0.05。
3、讨论
HBV中S基因的全序列与人体全基因组序列保持了高度的一致性，根据S基因序列的差异可以将HBV分为A-H八种不同的基因型，在我国以B型和C型最为常见，北方人群以HBV-C基因型为主，而南方则以HBV-B基因型为主、C基因型也占到一定比例。近年来的研究认识到，不同基因型HBV对机体的感染能力不同，这也是导致乙型肝炎患者病变程度不一致的内在原因[2]。
HBV感染机体后最突出的表现在于病毒DNA自身不断复制并对正常肝细胞进行攻击。HBV的自身复制能力越强，体内DNA载量也越高，进而会导致肝细胞损伤加重。因此，检测HBV-DNA的拷贝数能够准确反应病毒的感染能力。本研究的分析结果显示，C型组患者的HBV-DNA病毒载量高于B型组。这就初步提示C基因型HBV在感染肝细胞后的复制能力较强，可能会造成肝细胞更严重的损害。
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肝细胞内含有丰富的转氨酶并参与机体内多种物质的代谢，当细胞受到HBV的攻击后会发生破裂并导致胞浆内的转氨酶释放入血。丙氨酸氨基转移酶ALT、天门冬氨酸氨基转移酶AST是反应肝细胞损伤程度最常用的两种转氨酶。本研究通过分析血清中转氨酶的含量可知，C型组患者血清ATL和AST含量高于B型组，由此说明C基因型HBV对肝细胞的损伤程度较重，这也与C基因型HBV复制能力较强的结果相吻合。
机体免疫功能是清除HBV的主要机制，其中T细胞所介导的细胞毒效应对于抵抗病毒入侵、清除HBV具有重要作用。CD4+T淋巴细胞是细胞免疫的执行者，能够分泌多种细胞因子来促进免疫细胞成熟、具有明确的抗病毒作用；CD8+的功能是通过细胞溶解作用来清除病毒，但同时也具有一定的免疫抑制效应。HBV感染会造成免疫功能损伤，本研究分析通过分析免疫功能指标可知，C型组患者外周血中CD4+T细胞含量以及CD4+/CD8+T细胞比值低于B型组，这就说明C基因型HBV感染对机体免疫功能的损伤较大。
综合以上讨论我们总结如下：C基因型病毒感染乙肝患者的整体病情比B基因型感染患者严重，表现为HBV-DNA载量更高、肝细胞损伤和免疫功能损伤更严重。
参考文献
[1]林娟娟，张宝华. 慢性乙型肝炎患者感染的病毒基因分型与部分肝功能指标分析[J]. 检验医学与临床，2014，11(9)：1256-1257.
[2]钟大妮，李国坚，吴继周，等. 广西地区乙肝病毒基因分型与临床表现及机体免疫功能关系的研究[J]. 中国医学创新，2013，10(2)：1-3., 百拇医药(武欣越)