流式细胞免疫表型分析在恶性淋巴瘤诊断中的价值
摘要：目的：观察流式细胞免疫表型分析诊断恶性淋巴瘤准确率，探讨其诊断价值。方法：选择本院经组织病理学检查确诊为霍奇金淋巴瘤20例及非霍奇金淋巴瘤20例作为研究对象，均经细胞穿刺学检查及流式细胞免疫表型分析，观察两组方法检查正确率，比较正确率等。结果：20例经组织病检确诊为霍奇金淋巴瘤中，经针刺细胞学检查正确14例，正确率70.0%，流式细胞免疫表型分析检查正确18例，正确率达到90.0%；20例确诊为非霍奇金淋巴瘤，经针刺细胞学检查为非霍奇金淋巴瘤15例，正确率75.0%，流式细胞免疫表型分析检查正确17例，正确率85.5%，流式细胞免疫表型分析诊断恶性淋巴瘤准确率更优，P<0.05。结论：流式细胞免疫表型分析诊断恶性淋巴瘤准确率较高，具有重要诊断价值。
关键词：流式细胞免疫表型分析恶性淋巴瘤诊断价值
Doi：10.3969/j.issn.1671-8801.2014.09.148【中图分类号】R4【文献标识码】B【文章编号】1671-8801(2014)09-0094-02
, 百拇医药
目前，恶性淋巴瘤患者临床并不少见，早期、正确诊断对患者治疗具有重要意义[1]。随着理念技术、仪器的迅速发展，临床已有多种方法可应用。细胞穿刺学检查、免疫组化检查、流式细胞免疫表型分析、组织病理学检查等均有所应用。流式细胞免疫表型分析于20世纪70年代发明，其用于恶性淋巴瘤诊断中具有重要优势，具有重要地位，其具有检测快捷、敏感以及多参数定量分析等优点[2]。相关研究表明，流式细胞免疫表型分析应用于恶性淋巴瘤检测准确率较高，具有重要临床价值，本研究旨在探讨其诊断正确率，报道如下。
1临床资料
1.1一般资料。选择本科室于2013年1月-2014年1月收集的恶性淋巴结肿瘤40例入选本研究，经检查霍奇金淋巴瘤20例及非霍奇金淋巴瘤20例，患者年龄11-67岁，平均年龄(43.4±7.9)岁，男27例，女13例。40例均分别经细胞穿刺学检查及流式细胞免疫表型分析检查给予诊断。
1.2方法。40例均经组织病理学检查确诊。针刺细胞学检查组：行穿刺活检，作细胞形态学检查观察。流式细胞免疫表型分析组：①制备单细胞悬液：先剪碎新鲜组织，以网搓法行细胞分离，然后以转速1000r/min离心4min，去除上清液，使用PBS洗3次，每次均以转速500r/min离心5min。②荧光单克隆抗体选择：本研究B系单克隆抗体选择HLA-DR，CD34、CD5、CD10、CD19、CD23、CD79a以及CD20、CD22等，；T系选择CD4、CD8、CD3、CD5、CD7等。③荧光抗体标记 使用计数板调整单细胞悬液浓度，于每管中取100uL，先行三色荧光染色，然后分别加入相应荧光单抗5ul，混匀，于室温避光温育15min，PBS200ul加入，设置转速1000r/min离心，时间5min，弃去上清液，加入PBS500ul悬浮细胞上机检测。④FCM检测、分析 先行流式细胞仪流路及光路校正；设置仪器参数，常规抗体检测设置为FITC/PE/PC5荧光通道，轻链设置为FITC/PE/ECD荧光通道；去除非特异性荧光行同型对照组检测；检测过程中注意调整电压；常规FFC/SSC设门，观察细胞大小及细胞内颗粒情况。依据检测结果判断组织分型。
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1.3流式细胞免疫表型分析结果评价：①阴性：抗原表达量低于20%；②阳性：抗原表达量大于50%；③可疑阳性：20%-50%。
1.4统计学处理：采用SPSS13.0统计软件进行统计分析，采用X2检验计数资料，t检测计量资料，P<0.05，差异明显。
2结果
2.1霍奇金淋巴瘤两种方式检测分析。20例经组织病检确诊为霍奇金淋巴瘤中，经针刺细胞学检查正确14例，正确率70.0%，流式细胞免疫表型分析检查正确18例，正确率达到90.0%，两种方式比较有明显差异，X2=7.95，P<0.05。
2.2非霍奇金淋巴瘤两种方式检测分析。20例确诊为非霍奇金淋巴瘤，经针刺细胞学检查为非霍奇金淋巴瘤15例，正确率75.0%，流式细胞免疫表型分析检查正确17例，正确率85.5%，两组比较差异明显，X2=5.83，P<0.05。
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3讨论
恶性淋巴性肿瘤(ML)临床并不少见，具有异质性大、分型诊断复杂特点，临床诊断难度较大。ML对患者影响巨大，严重威胁生命安全。目前，ML诊断主要依据生物学行为、病理组织学形态以及免疫表型等分类，相关研究表明，免疫表型在国内淋巴瘤诊断辅助手段中具有重要地位，其结合外科活检已成为常规检查方式。流式细胞免疫表型分析(FCI)诊断在恶性肿瘤诊断中具有多方面优势，检测快速、敏感以及多参数定量分析优点逐渐受到临床欢迎。FCI敏感度较高，且检测操作程度较为规范，因人为因素影响结果较小，还可同时对细胞行多抗体标记，检测结果为定量数据，正确率及科学性高。
研究[3]表明，FCI可辨别部分T/NK系统淋巴瘤，其主要通过标记观察系列特异性抗原，如CD3、CD4、CD7、CD8、CD56等确定细胞来源，有助于正确诊断。相对于其他检测方式，FCI还具有检测肿瘤CD20是否表达，还可反映其表达强弱，对判断治疗效果具有重要意义。本研究采取FCI检测发现无论是霍奇金淋巴瘤，抑或非霍奇金淋巴瘤，检测率均较高，P<0.05。总之：流式细胞免疫表型分析诊断恶性淋巴瘤准确率较高，具有重要诊断价值。
参考文献
[1]刘志广，黄教娣，阎占清等.流式细胞分析在淋巴瘤和白血病诊断及鉴别诊断中的应用[J].中华病理学杂志，2002，31(4)：352一355
[2]谢彦，勇威本，河福金等.细针穿刺流式细胞术检测在非霍奇金淋巴瘤诊中的应用[J].中国肿瘤临床，2005，32(10)：592一593
[3]胡永军，金恂，张晓飞.流式细胞免疫表型分析在恶性淋巴瘤诊断中的应用研究[J].交通医学，2011，25(5)：443-446, http://www.100md.com(罗代平)
关键词：流式细胞免疫表型分析恶性淋巴瘤诊断价值
Doi：10.3969/j.issn.1671-8801.2014.09.148【中图分类号】R4【文献标识码】B【文章编号】1671-8801(2014)09-0094-02
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目前，恶性淋巴瘤患者临床并不少见，早期、正确诊断对患者治疗具有重要意义[1]。随着理念技术、仪器的迅速发展，临床已有多种方法可应用。细胞穿刺学检查、免疫组化检查、流式细胞免疫表型分析、组织病理学检查等均有所应用。流式细胞免疫表型分析于20世纪70年代发明，其用于恶性淋巴瘤诊断中具有重要优势，具有重要地位，其具有检测快捷、敏感以及多参数定量分析等优点[2]。相关研究表明，流式细胞免疫表型分析应用于恶性淋巴瘤检测准确率较高，具有重要临床价值，本研究旨在探讨其诊断正确率，报道如下。
1临床资料
1.1一般资料。选择本科室于2013年1月-2014年1月收集的恶性淋巴结肿瘤40例入选本研究，经检查霍奇金淋巴瘤20例及非霍奇金淋巴瘤20例，患者年龄11-67岁，平均年龄(43.4±7.9)岁，男27例，女13例。40例均分别经细胞穿刺学检查及流式细胞免疫表型分析检查给予诊断。
1.2方法。40例均经组织病理学检查确诊。针刺细胞学检查组：行穿刺活检，作细胞形态学检查观察。流式细胞免疫表型分析组：①制备单细胞悬液：先剪碎新鲜组织，以网搓法行细胞分离，然后以转速1000r/min离心4min，去除上清液，使用PBS洗3次，每次均以转速500r/min离心5min。②荧光单克隆抗体选择：本研究B系单克隆抗体选择HLA-DR，CD34、CD5、CD10、CD19、CD23、CD79a以及CD20、CD22等，；T系选择CD4、CD8、CD3、CD5、CD7等。③荧光抗体标记 使用计数板调整单细胞悬液浓度，于每管中取100uL，先行三色荧光染色，然后分别加入相应荧光单抗5ul，混匀，于室温避光温育15min，PBS200ul加入，设置转速1000r/min离心，时间5min，弃去上清液，加入PBS500ul悬浮细胞上机检测。④FCM检测、分析 先行流式细胞仪流路及光路校正；设置仪器参数，常规抗体检测设置为FITC/PE/PC5荧光通道，轻链设置为FITC/PE/ECD荧光通道；去除非特异性荧光行同型对照组检测；检测过程中注意调整电压；常规FFC/SSC设门，观察细胞大小及细胞内颗粒情况。依据检测结果判断组织分型。
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1.3流式细胞免疫表型分析结果评价：①阴性：抗原表达量低于20%；②阳性：抗原表达量大于50%；③可疑阳性：20%-50%。
1.4统计学处理：采用SPSS13.0统计软件进行统计分析，采用X2检验计数资料，t检测计量资料，P<0.05，差异明显。
2结果
2.1霍奇金淋巴瘤两种方式检测分析。20例经组织病检确诊为霍奇金淋巴瘤中，经针刺细胞学检查正确14例，正确率70.0%，流式细胞免疫表型分析检查正确18例，正确率达到90.0%，两种方式比较有明显差异，X2=7.95，P<0.05。
2.2非霍奇金淋巴瘤两种方式检测分析。20例确诊为非霍奇金淋巴瘤，经针刺细胞学检查为非霍奇金淋巴瘤15例，正确率75.0%，流式细胞免疫表型分析检查正确17例，正确率85.5%，两组比较差异明显，X2=5.83，P<0.05。
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3讨论
恶性淋巴性肿瘤(ML)临床并不少见，具有异质性大、分型诊断复杂特点，临床诊断难度较大。ML对患者影响巨大，严重威胁生命安全。目前，ML诊断主要依据生物学行为、病理组织学形态以及免疫表型等分类，相关研究表明，免疫表型在国内淋巴瘤诊断辅助手段中具有重要地位，其结合外科活检已成为常规检查方式。流式细胞免疫表型分析(FCI)诊断在恶性肿瘤诊断中具有多方面优势，检测快速、敏感以及多参数定量分析优点逐渐受到临床欢迎。FCI敏感度较高，且检测操作程度较为规范，因人为因素影响结果较小，还可同时对细胞行多抗体标记，检测结果为定量数据，正确率及科学性高。
研究[3]表明，FCI可辨别部分T/NK系统淋巴瘤，其主要通过标记观察系列特异性抗原，如CD3、CD4、CD7、CD8、CD56等确定细胞来源，有助于正确诊断。相对于其他检测方式，FCI还具有检测肿瘤CD20是否表达，还可反映其表达强弱，对判断治疗效果具有重要意义。本研究采取FCI检测发现无论是霍奇金淋巴瘤，抑或非霍奇金淋巴瘤，检测率均较高，P<0.05。总之：流式细胞免疫表型分析诊断恶性淋巴瘤准确率较高，具有重要诊断价值。
参考文献
[1]刘志广，黄教娣，阎占清等.流式细胞分析在淋巴瘤和白血病诊断及鉴别诊断中的应用[J].中华病理学杂志，2002，31(4)：352一355
[2]谢彦，勇威本，河福金等.细针穿刺流式细胞术检测在非霍奇金淋巴瘤诊中的应用[J].中国肿瘤临床，2005，32(10)：592一593
[3]胡永军，金恂，张晓飞.流式细胞免疫表型分析在恶性淋巴瘤诊断中的应用研究[J].交通医学，2011，25(5)：443-446, http://www.100md.com(罗代平)
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