人肿瘤ＭＵＣｌ／Ｙ基因真核表达载体的构建及在ＢＩＵ—87细胞中的表达

http://www.100md.com 2005年4月1日 罗 刚 周四维 鲁雄兵 宋晓东 孙 凯 曹正国 叶章群

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     摘要 目的：克隆人肿瘤MUCl/Y全长基因及构建真核表达载体pEGFP—MUCl/Y并观察pEGFP—MUCl/Y在BIu—87细胞中表达以用于进一步生物学功能及肿瘤生物学治疗的研究。方法：取新鲜膀胱肿瘤组织提取总RNA.采用随机引物进行反转录，将特异引物扩增的MUCl/Y全长PCR产物克隆至真核表达载体pEGFP—C1，测序鉴定后命名为pEGFP—MUC1/Y，用脂质体转染膀胱肿瘤细胞DIU—87，以Western Blot检测其表达情况。结果：酶切鉴定和序列分析证实构建质粒含人MUCl/Y全长cDNA编码序列，WestcrnBlot检测和转染实验，表明构建的pEGFP—MUCl/Y基因在DIU—87真核细胞中表达，其绿色荧光蛋白瞬时表达率为20%。结论：人肿瘤MUCl/Y全长cDNA基因克隆及其真核表达载体pEGFP—MUCl/丫构建成功，可用于肿瘤生物学治疗的研究。

    关键词 MuCl/Y；克隆；绿色荧光蛋白；真核表达

    中图分类号 Q784 文献标识码 A 文章编号 1671—88；2(2005)02—0186—04

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