葡萄糖苷酶Ⅰ特异性ｓｉＲＮＡ—ＥＧＦＰ真核表达载体的构建及表达

http://www.100md.com 2005年4月1日 李冬青 章晓联 戚中田

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     摘要 目的：构建葡萄糖苷酶I(slucosidaseidaseⅠ，GluI)特异性siRNA真核表达载体。方法：根据siRNA靶序列选取原则，设计并合成针对鼠葡萄糖苷酶IcDNA的寡聚DNA，退火井连接至载体pSilencerl.0—U6，再将U6启动子及下游插入片断一起切下，克隆至真核表达载体p2GFP—C1.通过限制性酶切和测序对重组表达载体进行鉴定，最后将该质粒转染至HeLa细胞，共聚焦荧光显微镜观察其表达。结果：①限制性酶切和测序结果表明成功构建了带有EGFP基因的鼠GluI特异性的siRNA真核表达载体pC—lU6glu；②共聚焦荧光显微镜观察结果表明p—ClU6glu成功转染至HeLa细胞。结论：pC—lU6glu的成功构建及表达为进一步利用siRN八研究葡萄糖苷酶Ⅰ的功能和治疗肿瘤奠定基础。

    关键词 葡萄糖苷酶Ⅰ；siRNA；真核表达载体

    中图分类号 R 392.11 文献标识码 A 文章编号 167l—8852(2005)02—0190—04

    http://www.100md.com/html/paper/1671-8852/2005/02/16.htm

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