人乳头瘤病毒16E7基因的原核表达及表达条件的优化
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摘要 目的:构建pET—28a(+)—HPVl6 E7原核表达质粒,并对其表达条件进行优化,为进一步研究HPVl6E7致病机制及HPV疫苗提供相应的技术平台。方法:应用基因重组技术,构建pET-28a(+)与HPVl6 E7(标准株和湖北株)的原核表达重组质粒,用PCR、限制性内切酶酶切和核酸序列检测对重组质粒DNA进行鉴定,将其转入宿主菌E.coli BL21(DE 3)进行诱导以表达蛋白;SDS-PAGE及Westernblot检测鉴定表达蛋白的分子量及特异性。优化诱导表达的条件,如温度、IPTG浓度、适用的培养基,探讨不同温度下蛋白的表达形式;纯化回收HPVl6 E7蛋白。结果:PCR、限制性内切酶酶切和核酸序列检测证实重组质粒中插入的目的基因,其DNA大小、方向、插人位点和阅读框架均正确;HPVl6 E7(标准株)蛋白得到高效原核表达,最佳表达条件:表达HPVl6 E7的工程菌BL21(DE 3)的最佳诱导温度是37℃,诱导剂IPTG的浓度为0.3—0.4 mmol/L,最佳培养基为1.5倍LB。结论:pET-28a(+)—HPVl6 E7标准株和湖北株重组载体构建成功,人乳头瘤病毒16 E7标准株获得高效原核表达。
关键词 HPV16E基因;重组;原核表达;优化
中图分类号:Q753
文献标识码:A
文章编号:1671—8852(2006)04—0415—06
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