真核表达载体ｐＥＧＦＰ－ＶＡＳＰ－ｌＣ的构建及其在ＨｅＬａ细胞中的表达

http://www.100md.com 2006年8月1日 张利军 魏 蕾 王婷婷 张京伟 彭小春 文显梅 李 华

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    摘要 目的：构建真核表达载体pEGFP—VASP—lC并稳定转染人宫颈癌细胞系HeLa细胞，为进一步探讨VASP—lC区介导的VASP的寡聚化在HeLa细胞迁移中的作用奠定基础。方法：用RT—PCR技术从人内皮细胞株ECV304细胞中获得VASP-lC区的cDNA并将其插入表达载体pEGFP-C1中，构建的重组质粒经脂质体介导转染HeLa细胞，Westernblot鉴定VASP—lC区在HeLa细胞中的稳定表达。结果：RT—PCR成功地扩增出一条约310bp的片段，经限制性内切酶酶切图谱分析和DNA序列测定证实目的基因已插入重组质粒，荧光显微镜下观察到稳定转染的细胞发出较强绿色荧光，Westernblot证明人VASP—lC区能以融合蛋白的形式在HeLa细胞中稳定表达。结论：成功构建了真核表达载体pEGFP—VASP—lC，获得了稳定表达人VASP—lC区基因的HeLa细胞克隆，便于进一步探讨VASP—lC区介导的VASP的寡聚化在HeLa细胞迁移中的作用。

    关键词 血管扩张刺激磷蛋白；真核表达载体；HeLa细胞；表达

    中圈分类号 R730.23 文献标识码 A 文章编号 1671—8852(2006)04—0421—04

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