黄天一，陈婷婷，崔杰，李梦雨，华永庆,3

    (1.南京中医药大学药学院，江苏 南京 210023；2.江苏省中药药效与安全性评价重点实验室，江苏 南京 210023；3.江苏省中药资源产业化过程协同创新中心，江苏 南京 210023)

    骨质疏松症(OP)是一种代谢性骨疾病，最终导致骨强度降低和骨折风险增加[1]。随着人口老龄化加剧，OP造成的公共卫生负担日益严重[2]，发现新的治疗药物仍是当前亟待解决的问题。成骨细胞介导的骨形成，在维持骨稳态中起到关键作用[3-4]。在OP形成过程中，机体内环境改变导致氧化应激(OS)水平增加，使得成骨细胞凋亡增加，骨稳态平衡被打破。因而，降低机体OS水平，抗成骨细胞凋亡对维持骨稳态具有重要意义。阿魏酸(FA)是一种酚酸类成分，是抗OP常用中药当归、川芎的有效成分之一。FA被证实具有抗炎、抗氧化、抗凋亡等多种生物活性[5]。近来研究发现FA可以预防卵巢切除大鼠的骨质流失[6]。当阿魏酸直接作用于成骨细胞时,可促进体外培养大鼠成骨细胞的增殖，显著性增加ALP活性和钙化结节的数量[7]，但对其作用机制尚缺乏深入研究。OP的发生与雌激素受体(ER)信号通路密切相关[8]。新型膜雌激素受体G蛋白偶联受体GPR30因其可介导雌激素的非基因组效应，避免ER经典途径的不良反应而受到关注，其在骨代谢疾病中的调控作用也不断得到证明[9]。中药抗OP活性成分槲皮素可以通过GPR30抑制破骨细胞的分化[10]，樱黄素选择性结合GPR30活化MAPK信号通路，促进成骨细胞增殖分化[11]。FA抗成骨细胞凋亡、清除活性氧(ROS)的作用是否与GPR30相关仍不清楚。本实验旨在研究FA对成骨细胞凋亡的影响，并探讨其与GPR30相关的作用机制，为进一步发现OP治疗药物奠定基础。

    1 材料

    1.1 药品与试剂

    MC3T3-E1细胞购自中国科学院上海细胞库，品系：小鼠颅顶前骨细胞亚克隆14；FITC AnnexinV Apoptosis Detection Kit Ⅰ(批号:8072965)购自BD Pharmingen;Bcl-2(批号:00062312)、β-tubulin兔单克隆抗体(批号:00056545)、FoxO3a兔单克隆抗体(批号:00055690)均购自Proteintech公司；G15(批号：3678/10)购自TOCRIS公司；过氧化氢(H2O2)购自南京宁试化学试剂有限公司；胎牛血清(批号：1715753)、α-MEM培养基(批号：1867733)购自GBICO公司；青霉素-链霉素(批号：L40523)购自北京全式金生物科技有限公司；FA(货号：B20007)购自上海源叶生物科技有限公司；ROS检测试剂盒(货号：S0033)购自上海碧云天生物科技有限公司 ......