谢佳雨,戴隆超,王娜,刘成,王令充

    (1.南京中医药大学药学院,江苏 南京 210023;2.上海中医药大学附属普陀医院,上海 200062)

    氨基酸、多肽、蛋白质是动物药中的主要成分,其中大多数还被现代研究证实是动物药的特效成分[2]。目前已经从土鳖虫中分离出多种活性多肽及蛋白成分,这些成分具有较强的抗肿瘤[3]、抗凝血/抗血栓形成[4-5]、抗氧化[6-7]、降血脂[8-9]、护肝[10-11]与免疫调节[12-13]等活性。土鳖虫多肽及蛋白类成分的研究难点聚焦于分离纯化和结构鉴定，由于其过低的分离率与多样化的组成成分,导致对土鳖虫大分子成分的结构与功能认识严重缺乏。为此需要进一步发现功能性土鳖虫大分子类成分及其药理药效的作用机制。

    1 材料

    土鳖虫药材购自上海中医药大学附属舟山中医院药房,经上海中医药大学普陀医院刘成研究员鉴定为中药土鳖虫EupolyphagasinensisWalker雌虫干燥体。正常人肝细胞株L-02、肝星状细胞HSC-T6、肝癌细胞株SMMC-7721(中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库);胎牛血清(ABW,批号:AB-FBS0500);TGF-β(Perprotech,批号:100-21);BCA试剂盒(南京建成,批号:A045-4-2);Annexin V-FITC细胞凋亡试剂盒(南京建成,批号:G003-1);Cellulose DEAE-52(北京索莱宝,批号:20180308);葡聚糖凝胶G-100(上海源叶,批号:2110G100L12);色谱级乙腈(Tedia,批号:22075171);色谱级甲醇(Tedia,批号:22065054)。其他市售化学品和试剂均为分析级。

    蛋白纯化仪AKTA Purifier 95(PekinElmer,型号:Envision);LC-MS/MS(Thermo Fisher,型号:Q Exactive);高效液相色谱仪(Waters,型号:e2695);倒置荧光显微镜(Nikon,型号:Eclip SE Ti-S);倒置显微镜(Olympus,型号:CKX-31) ......