冯韬,吕烨华,王盛,黄维,糜大国

    (南通大学附属南通市中医院,江苏 南通 226001)

    脊髓损伤(Spinal cord injury,SCI)是一种破坏性的神经系统损伤疾病,在病理生理学上包含2个阶段,即原发性损伤和继发性损伤[1]。这2个阶段尤其是继发性损伤阶段中凋亡信号传导、炎症反应、氧化应激、自由基形成等级联反应能够导致机体严重的神经功能障碍[2]。SCI以其高发病率、高致残率以及治疗护理的昂贵成本等特性,给患者家庭及社会造成了沉重的负担[3-5]。神经元细胞凋亡是继发性SCI持续存在所导致的病理表征,在中枢神经系统的扩大损伤过程中扮演重要角色。在大鼠SCI中,细胞凋亡最早在损伤后4 h发生,并在第7天达到高峰;在损伤部位,大部分少突胶质细胞在SCI后7 d内凋亡[6]。如何抑制神经元细胞凋亡、恢复急性SCI后的神经功能成为目前科学研究的热点。

    黄芪注射液(Astragalus injection,AS)是由中药黄芪提取而来,主要成分包含黄芪皂苷和黄酮两大类[7-8]。黄芪具有免疫调节、抗氧化、抗炎等良好功效,在肝损伤、糖尿病、癌症等疾病治疗中蕴藏着巨大应用价值[7,9-11]。黄芪对神经系统也具有较好的保护功能[12]。黄芪注射液可通过抑制死亡受体通路和线粒体通路中关键因子的激活抑制神经元细胞凋亡,降低神经毒性,发挥神经保护作用,进而缓解脑缺血性损伤[13-16]。黄芪注射液在急性SCI中发挥神经保护作用,但其机制尚不明确。本研究构建了大鼠急性SCI模型,探究黄芪注射液对大鼠急性SCI的神经保护作用及其机制,为预防和治疗SCI提供新的思路和数据支持。

    1 材料

    1.1 动物

    40只SPF级雄性SD大鼠,购自南京青龙山繁殖场,许可证号:SCXK(苏)2017-0001,体质量180～200 g。大鼠饲养于恒温(21～23 ℃)、恒湿(45%～65%)的环境中,保持12 h明暗循环,自由进食饮水。所有实验均遵循南通大学动物护理和使用指南,本实验方案获南通大学实验动物伦理委员会批准，批号：S20201201-399。

    1.2 试剂

    黄芪注射液(上海禾丰制药有限公司,每支10 mL(相当于原药材20 g);尼氏染色液(北京百奥莱博科技有限公司,货号:YT167);TUNEL检测试剂盒:DAB(SA-HRP) TUNEL Cell Apoptosis Detection Kit(Servicebio,货号:G1507);TRIzol(Sigma,货号:T9424);UeIris Ⅱ RT-PCR System for First-Strand cDNA Synthesis(with dsDNase)(苏州宇恒生物科技有限公司,货号:R2028);2×SYBR Green qPCR Master Mix(苏州宇恒生物科技有限公司,货号:S2014);FAIM抗体(Affinity,货号:DF6119);FAS抗体(Affinity,货号:AF5342);Anti-TRAIL抗体(Abcam,货号:ab231063);Cleaved Caspase-8(Asp387)抗体(CST,货号:#9429);Anti-Bcl-2抗体(Abcam,货号:ab196495);Anti-Bax抗体(EPR18283)(Abcam,货号:ab182733);Cleaved Caspase-3(Asp175)(5A1E)Rabbit mAb(CST,货号:#9664);重组Anti-Caspase-9抗体(EPR18868)(Abcam,货号:ab184786);β-Tubulin抗体(CST,货号:#2146);山羊抗兔IgG(H+L)HRP二抗(Affinity,货号:S0001);ECL Plus检测试剂盒(Affinity,货号:K002) ......