顾鸣佳,高磊平,魏晴雪,朱莺,包能,张航,朱介宾

    (1.南京中医药大学常熟附属医院,江苏 常熟 215500;2.江南大学附属医院,江苏 无锡 214000)

    慢性肾衰竭(Chronic renal failure,CRF)是各类慢性肾脏疾病的最终转归,为我国目前所面临的一大公共卫生问题[1]。CRF的典型特征是肾纤维化[2],主要病理改变包括肾小管萎缩,肾间质炎性细胞浸润及细胞外基质(Extracellular matrix, ECM)沉积[3]。到目前为止,该病的发病机制尚未完全阐明,有效治疗手段匮乏。CRF属中医“虚劳”范畴,总体病因病机为脾肾两虚,浊瘀阻滞[4],项目组据此以孟河邹氏益肾泻浊法为指导思想[5]创制协定方,在临床上取得了不错的疗效,其主要药物包括黄芪、菟丝子、丹参、桃仁、红花、制大黄等。

    CRF的病变关键是肾纤维化,以肌成纤维细胞的形成和细胞外基质的分泌为主要特征。氧化应激[6]、炎症反应[7]和间质细胞形成[8]等病理反应是导致肾纤维化的直接原因,但调控上述病变的分子机制仍不明确。裸角质层同源物2(Naked cuticle homolog 2, NKD2)是果蝇裸表皮的哺乳动物直系同源体,位于染色体5p15.3,其C-端高度无序,N-端区域则包含大部分功能域,如酰胺化区、蓬乱蛋白结合区等[9]。NKD2在肿瘤领域被研究的较为深入,其常通过拮抗TGF-β等信号通路抑制肿瘤的生长和转移[10]。2020年底,Nature杂志首次在CRF领域关注到NKD2,指出人类肾纤维化主要归因于肌成纤维细胞的形成,而NKD2则是其特异性标记物[11],该发现为深入阐明CRF的发病机制和药物的作用原理指明了新的方向。据于此,我们拟从整体动物层面验证益肾泻浊方治CRF的疗效,并以NKD2为切入点初步探索其起效的分子机制。

    1 材料与方法

    1.1 动物

    45只雄性SPF级8周龄BALB/c小鼠,体质量21～25 g,购自常州卡文斯实验动物有限公司。动物许可证号:SCXK(苏)2016-0010。在南京中医药大学实验动物中心动物房饲养。小鼠适应环境1周(每日自由进食饮水),温度(21.0±2.0)℃,湿度(55.0±5.0)%,每日12 h光照,12 h避光。本实验通过南京中医药大学动物实验伦理会审查,伦理编号:A220307。

    1.2 药物与试剂

    益肾泻浊方(生黄芪15 g,党参15 g,炒白术10 g,茯苓10 g,菟丝子15 g,石斛30 g,川芎10 g,红花10 g,制大黄6 g,丹参30 g,焦山楂15 g,莪术10 g)中药购自江苏省中医院药房 ......