热刺激致动脉平滑肌增殖及血府逐瘀汤的干预作用
摘要：目的探讨热刺激对动脉管壁的影响及血府逐瘀汤的干预效果。方法局部热刺激兔耳，温度为43.0℃±0.5℃，每次3h，每日1次，共做3次。血府逐瘀汤组实验前3d及实验后一直用血府逐瘀汤6.0g/(kg·d)灌胃。各组均于造模后3d，7d，14d及28d时分别取材。采用光学显微镜及图像分析仪进行形态学观察。结果模型组热刺激后动脉平滑肌细胞层数及中膜厚度增加，造成管腔变狭。血府逐瘀汤组与模型组相比，增殖程度减小，各项观测指标均有不同程度的变化，但统计学分析仅28d时差异有统计学意义。结论热刺激可导致动脉管壁增厚，6.0 g/(kg·d)剂量的血府逐瘀汤对此有较好的干预作用。
关键词：动脉狭窄；血府逐瘀汤；增殖；热刺激
中图分类号：R541 R285.5
文献标识码：A
文章编号：1672—1349(2007)05—0414—02
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1实验动物中国家兔64只，体重18 kg～2.2 k，雄性，由湖南中医学院实验动物中心提供。
1.2药物与试剂 血府逐瘀汤全方为：当归9g，生地黄9g，桃仁12g，红花9g，枳壳6g，赤芍6g，柴胡3 g，桔梗5g，川芎5g，牛膝9g，甘草3g购自湖南中医学院附属第一医院。煎制方法：煎前经清水3次漂洗，于烧杯中煎煮30min去渣，滤纸过滤，浓缩至每毫升含生药1g，过滤除茼，4℃保存。
1.3仪器GSY型恒温水浴锅(北京医疗器械厂)；数字彩包图像分析仪(美国Optimas公司)；820型涡轮切片机(美旧Re-ichert公司)；线犁显微测微尺(长春市第一光学仪器)；Olympus BH—2显微镜(日本Olympus公司产)；局部加热器(湖南中医药大学组织胚胎学实验室)。
1.4动物分组及造模64只家兔随机分为模型组、假处理组、空白对照组和血府逐瘀汤组，每组16只，每组在热刺激后3d，7d，14d，28d时各处死4只。
, 百拇医药
模型组和血府逐瘀汤组造模方法：从耳根部起至耳尖部，测量兔耳中央动脉的长度，选取中央2cm的长度作为受试部位。将加热器置于受试部位，以胶布固定，使之紧贴皮肤。加热温度为43.0℃、±0.5℃假处理组仅给予同样的器具操作，温度与室温一致，时间均为每次3h，每H1次，连续做3次。空白对照组不加任何处理。血府逐瘀汤组热刺激前3d及热刺激后一直给予血府逐瘀汤6g/(kg·d)灌胃。所有动物均以普通兔饲料喂养。
1. 5标本的采集及处理按预定日期处死动物，将处理部位2cm及其上上下1cm的动脉取下，以动脉为长轴切成长0.5cm、宽约为0.8cm的长条。石蜡切片法。切片先用地依红染弹性纤维，再用HE染色
1.6观测指标均为光镜下观测，包括血管腔面积、中膜厚度的测量及血管壁平滑肌细胞层的计数。
1.7统计学处理所有数据以均数±标准差(χ±s)表示。多组均数比较进行方差齐性检查，方差齐采用方差分析、方差不齐采用tp检验，两组均数比较采用t检验。所有数据经SAS 6.12软件进行处理。
, 百拇医药
2 结果
2.1一般情况观察 实验后模型组兔耳局部轻度发红，持续20min～35min，假处理组和空白对照组无变化。所有动物耳部皮肤无溃烂及肿胀。兔子毛发有光泽，活动、进食及二便均未几异常。无生病及中途死亡发生。
2. 2血管相关性指标的观察模型组中膜有不同程度的增生。热刺激后3d可见局部内弹性膜厚度增加、基底部稀疏模糊，染色变浅，外缘较清晰；内弹性膜向管腔内突入，突人物中可见1层～2层平滑肌细胞。7d后，模型组的内弹性膜包绕在增生物周围，形态及染色未见异常；增生物主要由血管平滑肌细胞(VSMC)及胶原纤维构成。14 d28d时增生物继续增大，管腔进一步缩小。28d时，模型组管腔的大部分都被增生的中膜所占据。
模型组与同期假处理组和空白对照组相比，管腔明显缩窄，有统计学意义(P
3 讨论
, 百拇医药
血管平滑肌细胞增殖的模型有血管内介入法和血管外损伤法两种。前者包括血管内球囊扩张术、空气干燥术及钢圈植入法等；后者有钳夹兔耳模型、颈动脉袖套法、结扎颈动脉、电刺激动脉法和动脉外周石蜡包裹法等。尽管损伤的途径分别来自血管内外，但均能造成血管内弹性膜断裂，中膜平滑肌细胞从裂口处跨过，进入内膜下，造成内膜增厚，新内膜形成，使内皮细胞和内弹性膜之间的距离增大，从而导致血管腔狭窄。本模型采用皮肤外热刺激且温度相对不高，实验温度仅高于兔子体温3℃～4℃(家兔属恒温动物，体温为38.5℃～39.7℃)，动物的耐受性较好，局部未造成烫伤，说明刺激强度较小。热刺激后表现为平滑肌细胞增殖，导致中膜增厚，血管腔面积面积减小。
血府逐瘀汤是临床常用的治疗冠心病的有效方剂，日前除了汤剂，尚有丸剂和颗粒剂等剂型。临床研究表现，该方可有效改善冠心病病人手术后的血瘀症状，预防术后再狭窄。对冠心病的防治具有多靶点的特点。血府逐瘀汤对动脉粥样硬化病变中的血管平滑肌细胞增殖具有抑制作用，可能是通过抑制血小板原牛长因子A、B技C—myc基因表达来发挥功效。急性热应激能使血中血管紧张素Ⅱ明显升高。由于血管平滑H几细胞具有分泌血管紧张素原的功能，且含有血管紧张素转换酶，所以推测热刺激可使受热局部平滑肌细胞分泌过多的血管紧张素，通过自/旁分泌途径直接作用于平滑肌细胞；也可通过间接作用激活其他生长因子，如局部血小板生长因子-A(PDGFA)、内皮素-1(ET-1)等，共同作用于甲滑肌，促进其增殖及合成基质。此外，热刺激可引起细胞外基质成分的变化，改变平滑肌细胞对生长因子的反应能力，从而影响细胞的增殖能力因此，推断血府逐瘀汤对热刺激后的平滑肌增殖的抑制效应可能是通过抑制血小板原生长因子以及其他生长因子而产生的，其具体机制尚需进一步研究。
作者简介：屈波(1970—)，男，毕业于湖南中医药大学，主治医师，医学硕士，讲师，现工作于湖南中医药大学(邮编：410007)；王桂棠、蔡光先、刘柏炎，工作于湖南中医药大学。
(本文编辑 王雅洁), 百拇医药(屈 波 王桂棠)
关键词：动脉狭窄；血府逐瘀汤；增殖；热刺激
中图分类号：R541 R285.5
文献标识码：A
文章编号：1672—1349(2007)05—0414—02
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1实验动物中国家兔64只，体重18 kg～2.2 k，雄性，由湖南中医学院实验动物中心提供。
1.2药物与试剂 血府逐瘀汤全方为：当归9g，生地黄9g，桃仁12g，红花9g，枳壳6g，赤芍6g，柴胡3 g，桔梗5g，川芎5g，牛膝9g，甘草3g购自湖南中医学院附属第一医院。煎制方法：煎前经清水3次漂洗，于烧杯中煎煮30min去渣，滤纸过滤，浓缩至每毫升含生药1g，过滤除茼，4℃保存。
1.3仪器GSY型恒温水浴锅(北京医疗器械厂)；数字彩包图像分析仪(美国Optimas公司)；820型涡轮切片机(美旧Re-ichert公司)；线犁显微测微尺(长春市第一光学仪器)；Olympus BH—2显微镜(日本Olympus公司产)；局部加热器(湖南中医药大学组织胚胎学实验室)。
1.4动物分组及造模64只家兔随机分为模型组、假处理组、空白对照组和血府逐瘀汤组，每组16只，每组在热刺激后3d，7d，14d，28d时各处死4只。
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模型组和血府逐瘀汤组造模方法：从耳根部起至耳尖部，测量兔耳中央动脉的长度，选取中央2cm的长度作为受试部位。将加热器置于受试部位，以胶布固定，使之紧贴皮肤。加热温度为43.0℃、±0.5℃假处理组仅给予同样的器具操作，温度与室温一致，时间均为每次3h，每H1次，连续做3次。空白对照组不加任何处理。血府逐瘀汤组热刺激前3d及热刺激后一直给予血府逐瘀汤6g/(kg·d)灌胃。所有动物均以普通兔饲料喂养。
1. 5标本的采集及处理按预定日期处死动物，将处理部位2cm及其上上下1cm的动脉取下，以动脉为长轴切成长0.5cm、宽约为0.8cm的长条。石蜡切片法。切片先用地依红染弹性纤维，再用HE染色
1.6观测指标均为光镜下观测，包括血管腔面积、中膜厚度的测量及血管壁平滑肌细胞层的计数。
1.7统计学处理所有数据以均数±标准差(χ±s)表示。多组均数比较进行方差齐性检查，方差齐采用方差分析、方差不齐采用tp检验，两组均数比较采用t检验。所有数据经SAS 6.12软件进行处理。
, 百拇医药
2 结果
2.1一般情况观察 实验后模型组兔耳局部轻度发红，持续20min～35min，假处理组和空白对照组无变化。所有动物耳部皮肤无溃烂及肿胀。兔子毛发有光泽，活动、进食及二便均未几异常。无生病及中途死亡发生。
2. 2血管相关性指标的观察模型组中膜有不同程度的增生。热刺激后3d可见局部内弹性膜厚度增加、基底部稀疏模糊，染色变浅，外缘较清晰；内弹性膜向管腔内突入，突人物中可见1层～2层平滑肌细胞。7d后，模型组的内弹性膜包绕在增生物周围，形态及染色未见异常；增生物主要由血管平滑肌细胞(VSMC)及胶原纤维构成。14 d28d时增生物继续增大，管腔进一步缩小。28d时，模型组管腔的大部分都被增生的中膜所占据。
模型组与同期假处理组和空白对照组相比，管腔明显缩窄，有统计学意义(P
3 讨论
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血管平滑肌细胞增殖的模型有血管内介入法和血管外损伤法两种。前者包括血管内球囊扩张术、空气干燥术及钢圈植入法等；后者有钳夹兔耳模型、颈动脉袖套法、结扎颈动脉、电刺激动脉法和动脉外周石蜡包裹法等。尽管损伤的途径分别来自血管内外，但均能造成血管内弹性膜断裂，中膜平滑肌细胞从裂口处跨过，进入内膜下，造成内膜增厚，新内膜形成，使内皮细胞和内弹性膜之间的距离增大，从而导致血管腔狭窄。本模型采用皮肤外热刺激且温度相对不高，实验温度仅高于兔子体温3℃～4℃(家兔属恒温动物，体温为38.5℃～39.7℃)，动物的耐受性较好，局部未造成烫伤，说明刺激强度较小。热刺激后表现为平滑肌细胞增殖，导致中膜增厚，血管腔面积面积减小。
血府逐瘀汤是临床常用的治疗冠心病的有效方剂，日前除了汤剂，尚有丸剂和颗粒剂等剂型。临床研究表现，该方可有效改善冠心病病人手术后的血瘀症状，预防术后再狭窄。对冠心病的防治具有多靶点的特点。血府逐瘀汤对动脉粥样硬化病变中的血管平滑肌细胞增殖具有抑制作用，可能是通过抑制血小板原牛长因子A、B技C—myc基因表达来发挥功效。急性热应激能使血中血管紧张素Ⅱ明显升高。由于血管平滑H几细胞具有分泌血管紧张素原的功能，且含有血管紧张素转换酶，所以推测热刺激可使受热局部平滑肌细胞分泌过多的血管紧张素，通过自/旁分泌途径直接作用于平滑肌细胞；也可通过间接作用激活其他生长因子，如局部血小板生长因子-A(PDGFA)、内皮素-1(ET-1)等，共同作用于甲滑肌，促进其增殖及合成基质。此外，热刺激可引起细胞外基质成分的变化，改变平滑肌细胞对生长因子的反应能力，从而影响细胞的增殖能力因此，推断血府逐瘀汤对热刺激后的平滑肌增殖的抑制效应可能是通过抑制血小板原生长因子以及其他生长因子而产生的，其具体机制尚需进一步研究。
作者简介：屈波(1970—)，男，毕业于湖南中医药大学，主治医师，医学硕士，讲师，现工作于湖南中医药大学(邮编：410007)；王桂棠、蔡光先、刘柏炎，工作于湖南中医药大学。
(本文编辑 王雅洁), 百拇医药(屈 波 王桂棠)