脂联素球状结构域真核表达载体pcDNA3.0-gAd的构建
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黄敏 陈显久 王彦 杨静 山西医科大学第一医院;山西医科大学;
【摘要】目的构建脂联素球状结构域(globular adiponectin,gAd)的真核表达载体,为研究gAd对糖尿病、动脉粥样硬化等疾病的治疗奠定基础。方法从健康人全血中提取基因组DNA,PCR法获得脂联素球状结构域基因,经EcoRⅠ和XhoⅠ酶切后与pcDNA3.0真核表达载体重组得到pcDNA3.0-gAd,分别用PCR法和DNA测序法鉴定pcDNA3.0-gAd。结果以从健康人全血中提取出的高纯度基因组DNA为模板,PCR扩增出gAd基因,真核载体pcDNA3.0经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后与gAd基因进行体外重组,PCR法筛选出阳性克隆,DNA测序显示重组质粒pcDNA3.0-gAd的gAd基因与基因库中报道的脂联素基因序列(Gen-Bank:EU420013.1)中gAd序列完全一致,说明成功构建了pcDNA3.0-gAd,且序列正确。结论本研究为进一步从分子水平探究gAd基因和蛋白质的功能、深入探讨其生物作用机制创造了条件。
【关键词】 脂联素 球状结构域 真核表达载体
【基金】山西省科技攻关项目基金资助(No.20090321104)
【分类号】R341
脂联素是近年来发现由脂肪细胞分泌的一种蛋白质,其具有增加胰岛素敏感性[1]、抗动脉粥样硬化[2]、抗炎症[3]、防治肝纤维化[4]、抑制肿瘤生长[5]和影响骨代谢[6]等重要生物学作用。脂联素蛋白全长247个氨基酸,包含有N端信号序列、可变区、胶原样区和C端球状结构域(globular a
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