针刺联合川芎嗪处理对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响
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摘要：目的观察针刺联合川芎嗪处理对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响。方法取健康SD大鼠18只，以线栓法制备大鼠脑缺血再灌注模型。随机分为假手术即正常对照组(A组，n=6)、缺血再灌注损伤对照组(B组，n=6)和针刺联合川芎嗪干预组(C组，n=6)。再灌注24 h后取脑，固定切片，染色。用大鼠行为学改变、病理形态学变化、凋亡细胞数三个指标对干预效果作出评价。结果成功复制大鼠鼠脑缺血再灌注损伤模型；针刺联合川芎嗪干预组效果显著，可明显改善缺血再灌注所致的神经元损伤。结论针刺联合川芎嗪处理能够有效抑制大鼠脑缺血再灌注损伤中神经细胞的凋亡，对大鼠有较好的脑保护作用。
关键词：针刺 川芎嗪 脑缺血再灌注 大鼠
中图分类号：R743R285.5文献标识码：A文章编号：1672-1349(2011)05-0571-01
本研究在中医药理论的指导下，利用大鼠脑缺血再灌注损伤模型，观察了针刺联合川芎嗪处理对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响，从而为中医药在脑血管病的应用提供理论依据。
1材料与方法
1.1实验动物健康SD大鼠，体重280 g±20 g，由山西医科大学动物中心提供。本实验过程严格遵循有关动物实验保护规定。
1.2方法取健康小鼠18只按随机数字表法进行随机分组，将其分为3组，每组6只，分别为假手术组(A组)、对照组即缺血再灌注损伤组(B组)和针刺联合川芎嗪干预组(C组)。
1.2.1脑缺血模型的制备参考Longa[1] 报道的大鼠大脑中动脉阻塞再灌注模型,并加以改进。选用3.0 的单股尼龙手术缝线,将阻塞端灼烧成梭型。按手术步骤暴露右侧颈总动脉、颈外动脉和颈内动脉,从颈外动脉插线,栓塞右侧大脑中动脉。线栓深度距颈总动脉分叉17 mm±1.5 mm,假手术组除不插线外其他步骤相同。线栓保留2 h 后,小心拔除到颈总动脉分叉处恢复血流，缝合切口，分笼饲养观察。
1.2.2实验方法A组只分离血管，不给插线，也不干预。 B组分离血管，线栓2 h后拔除从而恢复灌注，但不干预。 C组在术后2 h，针刺百汇和足三里，同时川芎嗪腹腔给药(40 mg/kg)。各组1 d后断头取脑组织，放入10%的多聚甲醛中保存，以备染色。
1.2.3检查指标和方法术后通过水迷宫实验观察各组小鼠行为学表现。水迷宫按照AAA制作[2]。分三阶段进行训练，记录大鼠游完全程到达终点所需时间与进入盲端次数(错误次数)；标本固定后，包埋，冠切片，做苏木精-伊红染色(HE染色)，光镜下观察脑组织细胞形态变化；凋亡细胞原位末端标记法(TUNEL)染色，光镜下计数凋亡细胞数，计算各组凋亡细胞率。
1.2.4统计学处理计量资料以均数±标准差(x±s)表示，采用单因素方差分析，组间进行多重比较。应用SPSS17分析。
2结果
2.1各组行为学改变缺血组较正常对照组游泳时间延长，错误次数增多(P<0.05)；干预组较缺血组错误次数减少，游泳时间缩短(P<0.05)；干预组和假手术组比较无统计学意义(P>0.05)。详见表1。
2.2各组病理形态学变化假手术组神经元细胞规整，染色均匀。细胞核完整，核仁明显；缺血组正常神经元细胞数明显减少，可见散在的凋亡细胞，细胞核固缩，深染成蓝紫色，细胞水肿受压，排列凌乱；干预组绝大多数神经元细胞保持正常形态。
2.3凋亡细胞数C组凋亡细胞率较B组缺血组明显减少(P<0.05)；与A组假手术组无统计学意义(P>0.05)。详见表2。
3讨论
针刺具有疏通经络、调畅气血、调和脏腑阴阳的功效，并且对血脂、血液流变学、血生化指标、脑电图等具有一定影响[3]。川芎嗪是中药川芎的有效成分之一，川芎具有活血化瘀的作用[4]。针刺与中药两种方法均应用于临床脑缺血再灌注损伤的治疗中，但是目前尚无关于二者联合应用效果的报道。
本课题选取大鼠对缺血最敏感的脑组织海马CA1区为观察对象，采用针刺联合川芎嗪处理对大鼠脑缺血再灌注损伤进行医学干预。观察结果表明，针刺联合川芎嗪干预可使小鼠行为学表现，海马CA1区细胞形态，组织结构接近正常。干预组凋亡细胞数较缺血损伤组显著减少。针刺联合川芎嗪干预对大鼠脑缺血再灌注损伤有较好的保护作用。
参考文献:
[1]Longa EZ,Weinstein PR,Calson S,et al.Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats[J] ......
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