安宫牛黄丸对出血性中风大鼠的实验研究(2)
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1.2.2模型制作建立出血性中风大鼠模型,参照文献[1]方法，用氯胺酮、阿托品、安定按1∶1∶1稀释至10 mL，0.75 mL/100 g腹腔注射。根据图谱定位右侧尾壳核。用50 μL微量注射器从一侧股动脉插管中抽取新鲜未肝素化自体动脉血50 μL，将微量注射器固定于定位仪上，沿钻孔垂直进针至硬脑膜下5.5 mm处，缓慢将自体血注入脑。
1.2.3平衡木行走试验(beam-walking test)[2]术后1 d、2 d、3 d测定运动整合及协调能力，平衡木长80 cm，宽2.5 cm，平
1)为国家自然科学基金(No.30760315)
放在距离地面高10 cm处。按Feeney的记分标准，0分：穿过平衡木，不会跌倒；1分：穿过平衡木，跌倒机会少于50%；2分：穿过平衡木，跌倒机会大于50%；3分：能穿过平衡木，但受累的瘫痪侧后肢不能帮助向前移动；4分：不能穿过平衡木，但可坐在上面；5分：将大鼠放在平衡木上会掉下来。
1.2.4肌力测验或双侧前爪抓握(bilateral forepaws grasp)[3]术后1 d、2 d、3 d进行大鼠肌力测验，直径0.15 mm铁丝绳，长46 cm，置于距地面70 cm高度上，其下放高3.5 cm泡沫箱。将大鼠两个前爪放在绳上，放开，记录大鼠在绳上的时间。0分：挂在绳上0～2 s；1分：挂在绳上3 s～4 s;2分：挂在绳上5 s;3分：挂在绳上5 s，将后腿放在绳上。
1.2.5血液标本检测至实验终点时，将每只动物麻醉后取3份血样。一份取全血抗凝处理后用SYSMEX-XT-2000i型血细胞分析仪及配套试剂检测血常规，包括血红蛋白(Hb)、红细胞计数(RBC)、白细胞总数(WBC)以及血小板(PLT)。一份抗凝处理后，充分混匀，置离心机内3 000 r/min离心10 min,取上层血浆,置于ACL TOP全自动血凝分析仪中检测凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血酶原时间(APTT)、凝血酶时间(TT)和纤维蛋白(FIB)含量。另一份不抗凝分离血清，采用AU-2700全自动生化分析仪及配套试剂测定丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)。
1.2.6统计学处理采用SPSS 17.0软件分析。计量资料以均数±标准差(x±s)表示。若方差齐，则采用方差分析，若方差不齐，则采用Kruskal-Wallis检验，组间比较采用Mann-Whitney检验。
2结果
2.1各组大鼠死亡情况脑出血模型成功以神经功能评定明显对侧肢体感觉运动功能障碍为依据。空白对照组10只大鼠未予以造模处理，实验中途无死亡。至实验终点时，B组共有15只大鼠死亡,C组共有9只大鼠死亡，D组共有11只大鼠死亡，E组共有6只大鼠死亡。
2.2各组凝血功能、血常规、肝肾功能比较(见表1～表5)
3讨论
出血性中风发病急骤，病机变化多端，患者轻则口眼歪斜、半身不遂，重则神志逐渐昏迷，乃致死亡，出血性中风急性期多因风、火、痰浊、血瘀阻闭脑窍，以实证为主。既往中医药对出血性中风的研究介入时间点多在恢复期和后遗症期，而二级预防的最佳时机是出血性中风急性期。安宫牛黄丸属于中医凉开三宝之首,因其性最凉,故凡见病邪逆传心包或心包热较甚之证,首选安宫牛黄丸[4]。安宫牛黄丸与紫雪丹、至宝丹合为开窍三宝，是清心开窍法的代表方,在急性脑病救治中被广泛应用,体现了中医学在急重症领域中不可忽视的地位和不可替代的作用[5]。因此，探索安宫牛黄丸对于急性期出血性中风病的治疗具有重要意义。
安宫牛黄丸含有重金属汞砷，为其在临床广泛应用及出口带来一定的负面影响。近年来，多数学者对其毒性及机制探讨各抒己见。正常生理状态下较长时间服用安宫牛黄丸后，对心肌、肾、红细胞、脾等有一定的损伤作用，而在局灶性脑梗死及感染性脑水肿病理状态下安宫牛黄丸对机体的损伤作用比在正常生理状态下小，安宫牛黄丸在生理、病理状态下对机体的作用方式和途径可能存在差异。本实验结果显示,各治疗组与模型组大鼠通过药物干预后凝血功能(TT、APTT、FIB、PT)、血常规(WBC、RBC、HGB、PLT)肝肾功能(ALT、AST、Cr、BUN)与空白对照组相比均无明显差异，提示安宫牛黄丸并非通过上述途径影响脑出血大鼠，同时，也提示出血性中风大鼠使用安宫牛黄丸干预后，外周血红细胞、血红蛋白、白细胞、血小板以及凝血功能、肝肾功能检查未发现明显异常。说明安宫牛黄丸对急性出血性中风大鼠无明显不良反应。
平衡木试验是直接反映大鼠运动协调与整合能力的指标。双侧前爪抓握评分是评估前爪抓握力和肌力的一项指标。通过神经功能观察发现,各组大鼠造模后均出现不同的运动平衡功能障碍与肌力的减退，提示脑出血模型制造成功，造模后48 h、72 h安宫牛黄丸治疗组大鼠神经功能缺损明显低于模型组，而中西结合治疗组大鼠神经功能缺损则明显低于安宫牛黄丸及西药治疗组。提示安宫牛黄丸可以改善急性出血性中风大鼠神经功能，尤以与常规西药联用效果更佳，但其确切的作用机制还有待进一步研究。
参考文献：
[1]Rosenberg GA,Mun-Bryces,Wesley M,et al.Collagenase-induced intracerebral hemorrhage in rats[J].Stroke,1990,21:801-803 ......
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