安宫牛黄丸对实验性大鼠脑缺血的保护作用(2)
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1.3 仪器 显微手术器械(上海医疗手术器械厂)；电子分析天平(MC,京制0000249号,北京赛多利斯仪器系统有限公司)；电热恒温鼓风干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)；TGL-16C台式高速离心机(金坛市医疗仪器厂制造)；酶标分析仪(美国伯乐公司制造，X Mark)；参照文献【sup】[3]【/sup】，选用4-0尼龙线,栓线直径为0.25 mm～0.28 mm。
1.4 方法
1.4.1 动物分组与给药 将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、安宫牛黄丸组(中药组)、西药组、中西药组；假手术组、模型组均给予等容量生理盐水3 mL灌胃；安宫牛黄丸组给予3 mL安宫牛黄丸溶解液灌胃治疗；西药组给予20%甘露醇2.625 mL、速尿0.42 mg尾部静脉注射；中西药组在西药组治疗的基础上加用安宫牛黄丸(将1.134 g安宫牛黄丸加入54 mL水中溶解稀释)；每只3 mL溶解液灌胃。动物造模后连续灌胃给药4 d，于末次给药后分别处死。
1.4.2 大鼠局灶性脑缺血模型的建立 参照文献采用线栓法制备大脑中动脉(MCA)局灶性脑缺血模型【sup】[4]【/sup】:大鼠腹腔注射麻醉(即阿托品、氯胺酮、安定各2 mL、4 mL、4 mL，稀释至20 mL，0.75 mL/100 g)后,仰卧固定,颈部正中切口,钝性分离甲状腺，将其上翻并用无菌纱布保护，分离右侧颈总动脉(common carotid artery，CCA)、颈内动脉(internal carotid artery，ICA)、颈外动脉(externa1 carotid artery，ECA),并在ECA、ICA分叉处结扎ECA,右侧CCA剪口约0.2 mm的侧“V”字形切口，插入头端烧成圆钝形直径为0.28 mm的尼龙线,使线栓经过CCA分叉处进入ICA，到达MCA起始处，进线长度约(18.5±0.5) mm,感觉有阻力时即停止插入，并向外稍拉出一点即可实现MCA起始端堵塞MCA所有的血液来源,然后将CCA连同尼龙鱼线一起结扎，扎紧备线，甲状腺复位，关闭并缝合皮肤切口。假手术组大鼠接受相似手术处理，但是不插入线栓。缝合皮肤,实现MCAO造模完成。动物入选标准(按Longa五级评分法【sup】[5]【/sup】取神经功能行为评分为1分、2分、3分、4分的动物)：选择苏醒后左上肢屈曲、行走时向左侧旋转或左侧肢体瘫痪的大鼠为栓堵成功者进行实验,否则视为栓堵失败,弃之不用。模型成功后，分别于MCAO后6 h、24 h、48 h、72 h进行神经功能行为评分；大鼠在断头处死前取血清检测IL-10含量:各组大鼠麻醉后腹主动脉取血法分别取全血约5 mL，室温下放置20 min，然后以2 500 r/min离心10 min，小心吸取上清液即为血清标本(溶血标本不用)，常温下保存备用。
1.5 观察指标及测定方法
1.5.1 神经功能行为学评分测定 动物苏醒后，按Longa法【sup】[5]【/sup】对其神经功能行为进行5分制评分：0分，无明显神经病学症状；1分，不能完全伸展左侧前爪；2分，向左侧旋转；3分，行走时向左侧倾倒；4分，不能自行行走。
1.5.2 脑系数 动物称重,造模给药4 d后断头取脑,沿脑桥上界水平切断,取全脑称重,脑系数全脑重÷体重×100%。
1.5.3 脑组织含水量的测定 造模给药4 d后断头取脑，去除小脑、嗅球、低位脑干等，用滤纸吸干表面水分，称量脑湿重，105 ℃烘烤24 h至恒重，精确称量干重，采用Elliot【sup】[6]【/sup】公式计算脑组织含水量。
1.5.4 血清IL-10含量测定 酶联免疫吸附法(ELISA法)检测IL-10含量，具体操作步骤参照试剂盒说明书。
1.6 统计学处理 实验数据以均数±标准差(x±s)表示，采用SPSS 17.0软件做统计分析；组间比较用单因素方差分析及Student-Newman-Keuls test统计。
2 结 果
2.1 一般状态 假手术组大鼠麻醉苏醒后精神好，反应灵活，活动度大，全部存活，未见明显对侧肢体活动障碍。其余各组术后4 d精神均较造模前差，反应迟钝，饮食较前减少，自洁能力下降，扎堆蜷缩，均出现不同程度的肢体活动障碍，而以模型组为甚；其中模型组、西药组、中西药组分别有2只大鼠造模后半小时左右死亡；中药组有1只大鼠造模后昏迷不醒，于第2天死亡。
2.2 体重指数 大鼠造模前称重(g)为基础值，造模后第1天、第2天、第3天、第4天分别称重，取各时间点体重与基础值之比,即体重指数。与模型组比较，各组动物术后均有体重渐回升的过程；而假手术组体重上升较明显，与其他各组比较有统计学意义(P<0.05)；中西药组次之，与模型组、中药组、西药组比较有统计学意义(P<0.05)。中药组与西药组比较无统计学意义(P>0.05)。详见表1。表1 各组大鼠体重指数检测结果(x±s)kg/m【sup】2【/sup】
2.3 神经功能行为学评分 假手术组大鼠都没有神经功能行为学症状，而模型组、中药组、西药组、中西药组大鼠则有不同程度的神经功能行为学表现。与模型组大鼠比较，中药组、西药组、中西药组均可降低大鼠的神经功能行为学评分(P<0.05)，以中西药组疗效最为明显，与其他组相比差异有统计学意义(P<0.05)；中药组与西药组相比差异无统计学意义(P>0.05)。详见表2。表2 各组大鼠MCAO术后不同时间点神经功能评分(x±s) 分
2.4 各组对局灶性脑缺血大鼠脑水肿的影响(见表3) 与模型组比较，其他各组大鼠脑系数、脑组织含水量明显降低(P<0.05)；以中西药组最为明显，与中药组、西药组相比差异有统计学意义(P<0.05)；说明各用药组可减轻模型大鼠脑水肿症状。中药组与西药组比较无统计学意义(P>0.05)。
表3 各组对大鼠脑系数、脑组织含水量的影响(x±s)%
2.5 各组对局灶性脑缺血大鼠血清IL-10的影响(见表4) 与假手术组比较，各造模组IL-10均明显升高(P<0.05)，与模型组比较，中药组、西药组、中西药组明显升高(P<0.05)，以中西药组最为显著(P<0.05)；但中药组与西药组比较无统计学意义(P>0.05)。
表4 各组对大鼠血清IL-10表达的影响(x±s)ng/L
3 讨 论
安宫牛黄丸是我国传统药物中久负盛名的良方，是中医治疗中风之要药。安宫牛黄丸出自清代吴鞠通《温病条辨》，素有“救急症于即时，挽垂危于顷刻”的美誉，由牛黄、水牛角浓缩粉、麝香、珍珠、朱砂、雄黄、黄连、黄芩、栀子、郁金、冰片等11味药组成。具有清热解毒、豁痰开窍的功效，主治热病、邪入心包、高热惊厥、神昏谵语。临床研究表明，安宫牛黄丸制剂具有改善缺血性中风急性期神经功能缺损情况的作用【sup】[7]【/sup】。对于急性中风患者，安宫牛黄丸配合常规西医综合抢救治疗明显优于单纯常规综合抢救治疗【sup】[8]【/sup】。
IL-10作为一种抗炎性细胞因子，在缺血性脑损伤中具有脑保护作用 ......
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