5-HT1A受体对癫痫伴发抑郁的影响及神经保护研究(1)
 |
| 第1页 |
 |
| 第4页 |
参见附件(3457KB，7页)。
摘要：目的 通过建立氯化锂-匹罗卡品癫痫伴发抑郁的模型试验，评价5-HT1A受体激动剂8-OH-DPAT治疗癫痫伴发抑郁的疗效。方法 建立癫痫伴发抑郁大鼠模型，随机分为5组，生理盐水组、模型组、卡马西平组及卡马西加低、高剂量8-OH-DPAT组，分别给予相应药物，通过尼氏染色及胶质纤维酸性蛋白免疫组化的方法观察抗癫痫的疗效，通过强迫游泳，开放视野的行为学方法、荧光定量PCR方法测定5-HT1A受体表达量来评定抗抑郁的效果。结果 5-HT1A受体激动剂与卡马西平联合使用，且能明显的改善抑郁行为、可以增高5-HT1A受体mRNA的含量，同样也具有对抗神经元凋亡和胶质细胞活化的作用(P<0.05)。结论 5-HT1A受体激动剂不仅具有抗癫痫和抑郁的作用，而且也具有神经保护的作用。
关键词：匹罗卡品；癫痫；抑郁；5-HT1A受体
中图分类号：R742.1 文献标识码：A 文章编号：1672-1349(2011)06-0723-04癫痫是神经系统常见疾病之一,抑郁是癫痫病人常伴的心理障碍,文献统计20%～55%的癫痫病人合并抑郁【sup】[1]【/sup】，5-羟色胺(5-HT)与癫痫和抑郁发病均有关系,其中 5-HT1A,5-HT2C与5-HT7 被证明与癫痫有关【sup】[2]【/sup】,Maris等【sup】[3]【/sup】在海人酸大鼠模型中证实5-HT1A激动剂8-OH-DPAT可以显著的延长癫痫发作的潜伏期。对5-HT1A 受体与惊厥控制的研究较多,但结果不一,可能与选取的动物模型有关。氯化锂匹罗卡品癫痫大鼠模型是国际通用的、理想的颞叶癫痫模型。终末病理改变为海马神经元脱失、胶质细胞增生【sup】[4]【/sup】。但目前尚未有文献报道用8-OH-DPAT在氯化锂匹罗卡品模型中对海马等边缘系统脑区与癫痫有关的病理如神经元凋亡、胶质细胞增生的研究，本文旨在通过5-HT1A受体激动剂的干预是否有抗癫痫作用，从而进一步明确5-HT1A受体激动剂在癫痫发病机制中的作用，为癫痫伴发抑郁的治疗提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 实验动物及分组 成年雌性SD大鼠122只，重量为200 g～230 g，由山西医科大学动物实验中心提供，对照组6只，造模116只，腹腔注射氯化锂127 mg/kg,18 h后注射匹罗卡品30 mg/kg，诱发癫痫持续状态(SE)，给药30 min后未出现Ⅳ级以上发作，可继续追加剂量 10 mg/kg，极量为60 mg/kg，癫痫发作强度按Racine(1972年)法分级标准【sup】[5]【/sup】,待SE达40 min后腹腔注射地西泮4 mg/kg 终止SE,对照组(NS组)大鼠注射等量生理盐水，诱发成功后，经过一段静止期约15 d，进入慢性期，可观察到Ⅰ级～Ⅴ级的自发反复发作，出现自发性癫痫发作的大鼠为模型制作成功。成功率为81.9%，约95只大鼠，经过抑郁行为学测定，癫痫伴发抑郁的大鼠约24只，成功率为26%。模型随机分为4组：模型组(PILO)、卡马西平组(CBZ)、卡马西平+低剂量8-OH-DPAT组(CBZ+低剂量组)、卡马西平+高剂量8-OH-DPAT组(CBZ+高剂量组)，每组6只。CBZ组、CBZ+低剂量组、CBZ+高剂量组给予卡马西平80 mg/kg灌胃治疗1周，模型组用等体积的生理盐水腹腔注射，后两组分别给予低剂量0.1 mg/kg的 8-OH-DPAT(Sigma公司)，高剂量1 mg/kg 的8-OH-DPAT腹腔注射1周，每天1次。
1.2 建模过程中的抑郁行为学观察 实验过程中各组大鼠分别在癫痫造模成功后及药物干预1周后采用敞箱试验和强迫游泳客观指标进行情绪性行为评测定，敞箱装置(Open-filed-test)【sup】[6]【/sup】为长宽各100 cm、高50 cm、底面划分为25个等边方格的木箱，内面用黑漆涂满。08:00～10:00之间在安静的房间内进行此试验观察。将大鼠放入中心方格内，观察大鼠在3 min内中央格停留时间、水平穿越格数(四爪均进入的方格才记数，为水平运动得分)、后肢直立次数(两前爪腾空或攀附墙壁，为垂直运动得分)、理毛次数及粪便粒数。慢性强迫游泳应激后小鼠行为学观察参照Porsolt等【sup】[7]【/sup】的方法，置于水深10 cm的玻璃皿(高20 cm，直径14 cm)中，水温25 ℃，观察6 min，观察各组大鼠在后4 min内的累计不动时间。
1.3 病理及免疫组化
1.3.1 取材 给药1周后，大鼠断头取脑，冰皿上迅速分离一侧大脑，放入4%多聚甲醛中固定。
1.3.2 Nissle染色 切片常规脱蜡至水，蒸馏水洗后置于2%硫堇溶液中，于60℃恒温下浸染1 h，蒸馏水漂洗后，自然晾干，用95%乙醇迅速分色，二甲苯透明后中性树胶封片。大鼠石蜡标本每隔两片裱一张用作Nissle染色。
1.3.3 GFAP免疫组化染色 取上述普通切片,参照免疫组化试剂盒说明书进行(由武汉博士生物工程有限公司)提供，GFAP兔抗鼠单克隆抗体，大鼠石蜡标本每隔两片裱一张用作GFAP染色。
1.3.4 结果观察 各组染色切片在镜下观察，进行阳性细胞数计数或平均光密度值计算，对染色结果进行半定量分析。每个标本各取5张，高倍镜(40×10)下在海马区域取3个互相不重叠的视野，计数其中CA3区的阳性细胞或计算海马区域GFAP平均光密度值。
1.4 实时-荧光定量PCR法检测海马5-HT1A受体mRNA的表达
1.4.1 总RNA的提取及逆转录 取新鲜海马组织，在研钵中加适量液氮研磨成粉末状。操作严格按照Trizol试剂说明书提取总RNA并进行逆转录反应,步骤严格按操作说明书进行,逆转录的cDNA用于PCR反应。
1.4.2 荧光定量PCR反应体系的建立 各引物序列参照GenBank中的序列，用primer 5和ABI primer express 3 ......
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件(3457KB，7页)。