芎芍胶囊及丹参对大鼠缺血心肌血管新生的作用(2)
参见附件(12kb)。
1.4 分组与给药 清洁级(或SPF级)SD大鼠24只(雌雄各半)，分为3组，即芎芍胶囊组、丹参组、空白组，每组8只。灌胃给药，备用连续给药，6周后采集血，分离样本，并按规定保存。
1.5 取材 取实验组和对照组动物组织尽可能新鲜，磷酸盐缓冲液(PBS)洗，取小于0.5 cm×0.5 cm×0.1 cm组织块，用4%多聚甲醛(0.1 mol/L PBS,pH7.0～7.6,含0.1%DEPC)进行固定，经70%乙醇30 min、80%乙醇30 min、90%乙醇30 min两次、95%乙醇30 min两次、100%乙醇30 min两次、二甲苯透明30 min两次、55 ℃石蜡中30 min两次、用铜制模具包埋组织块；将厚度5 μm的组织切片附于经多聚赖氨酸附膜的载玻片上，60 ℃过夜；将切片浸于二甲苯中5 min两次、100%乙醇5 min两次、95%乙醇5 min两次、90%乙醇5 min两次、85%乙醇5 min两次、75%乙醇5 min两次、自来水冲洗、PBS洗两次；1%甲醇双氧水,室温10 min,蒸馏水洗1次,0.1 mol/L PBS洗3次，5 min;切片上滴加抗原修复液,室温10 min，0.1 mol/L PBS洗3次，5 min;切片上滴加正常山羊血清封闭液，室温20 min。甩去多余液体，不洗。切片上滴加第一抗体，4 ℃过夜，0.1 mol/L PBS洗3次,5 min。切片上滴加生物素化第二抗体(IgG)，37 ℃20 min，0.1 mol/L PBS洗3次,5 min；切片上滴加辣根酶标记链霉卵白素工作液(S-A/HRP)，37 ℃20 min，0.1 mol/L PBS洗3次,5 min； DAB使用DAB显色试剂盒1 mL蒸馏水加显色剂A、B、C各1滴，混匀，加至标本上，显色6 min，充分水洗；苏木素复染细胞核1 min，充分水洗、1%盐酸酒精分化、1%胺水反蓝、充分水洗、经70%乙醇5 min、80%乙醇5 min、90%乙醇5 min两次、95%乙醇5 min两次、100%乙醇5 min两次脱水、二甲苯透明5 min两次、中性树脂封片处死动物，1.6 血管新生相关因子检测 用ELISA法检测心肌组织中VEGF、FGF、EGF、TGF、PDGF的含量。
1.7 免疫组化评分方法 结合阳性细胞百分比及阳性细胞染色强弱两个方面评分:a为阳性细胞百分比，b为阳性细胞染色强弱，a，b两项乘积即为该例组织的免疫组化评分[1]。
1.8 统计学处理 应用STATA 16.0 统计分析软件。各组定量数据首先进行方差齐性检验，方差不齐者对原始数据对数转换达到方差齐性后进行F检验。
2 结 果
2.1 各组血管新生相关因子比较(见表1) 芎芍胶囊组对VEGF、EGF的促进作用较丹参组、对照组有统计学意义(P<0.05)，其中芎芍胶囊组、丹参组对FGF的促进作用与对照组比较均有统计学意义(P<0.05)，对照组对TGF、PDGF促进作用较芎芍胶囊组、丹参组有统计学意义(P<0.05)。
表1 各组血管生成因子比较(x±s)g/mL
2.2 各组免疫组化评分比较(见表2) 芎芍胶囊组对VEGF、EGF的促进作用较丹参组、对照组有统计学意义(P<0.05)，其中丹参组对FGF的促进作用与芎芍胶囊组、对照组比较均有统计学意义(P<0.05)，对照组对TGF、PDGF促进作用较芎芍胶囊组、丹参组有统计学意义(P<0.05) ......
1.4 分组与给药 清洁级(或SPF级)SD大鼠24只(雌雄各半)，分为3组，即芎芍胶囊组、丹参组、空白组，每组8只。灌胃给药，备用连续给药，6周后采集血，分离样本，并按规定保存。
1.5 取材 取实验组和对照组动物组织尽可能新鲜，磷酸盐缓冲液(PBS)洗，取小于0.5 cm×0.5 cm×0.1 cm组织块，用4%多聚甲醛(0.1 mol/L PBS,pH7.0～7.6,含0.1%DEPC)进行固定，经70%乙醇30 min、80%乙醇30 min、90%乙醇30 min两次、95%乙醇30 min两次、100%乙醇30 min两次、二甲苯透明30 min两次、55 ℃石蜡中30 min两次、用铜制模具包埋组织块；将厚度5 μm的组织切片附于经多聚赖氨酸附膜的载玻片上，60 ℃过夜；将切片浸于二甲苯中5 min两次、100%乙醇5 min两次、95%乙醇5 min两次、90%乙醇5 min两次、85%乙醇5 min两次、75%乙醇5 min两次、自来水冲洗、PBS洗两次；1%甲醇双氧水,室温10 min,蒸馏水洗1次,0.1 mol/L PBS洗3次，5 min;切片上滴加抗原修复液,室温10 min，0.1 mol/L PBS洗3次，5 min;切片上滴加正常山羊血清封闭液，室温20 min。甩去多余液体，不洗。切片上滴加第一抗体，4 ℃过夜，0.1 mol/L PBS洗3次,5 min。切片上滴加生物素化第二抗体(IgG)，37 ℃20 min，0.1 mol/L PBS洗3次,5 min；切片上滴加辣根酶标记链霉卵白素工作液(S-A/HRP)，37 ℃20 min，0.1 mol/L PBS洗3次,5 min； DAB使用DAB显色试剂盒1 mL蒸馏水加显色剂A、B、C各1滴，混匀，加至标本上，显色6 min，充分水洗；苏木素复染细胞核1 min，充分水洗、1%盐酸酒精分化、1%胺水反蓝、充分水洗、经70%乙醇5 min、80%乙醇5 min、90%乙醇5 min两次、95%乙醇5 min两次、100%乙醇5 min两次脱水、二甲苯透明5 min两次、中性树脂封片处死动物，1.6 血管新生相关因子检测 用ELISA法检测心肌组织中VEGF、FGF、EGF、TGF、PDGF的含量。
1.7 免疫组化评分方法 结合阳性细胞百分比及阳性细胞染色强弱两个方面评分:a为阳性细胞百分比，b为阳性细胞染色强弱，a，b两项乘积即为该例组织的免疫组化评分[1]。
1.8 统计学处理 应用STATA 16.0 统计分析软件。各组定量数据首先进行方差齐性检验，方差不齐者对原始数据对数转换达到方差齐性后进行F检验。
2 结 果
2.1 各组血管新生相关因子比较(见表1) 芎芍胶囊组对VEGF、EGF的促进作用较丹参组、对照组有统计学意义(P<0.05)，其中芎芍胶囊组、丹参组对FGF的促进作用与对照组比较均有统计学意义(P<0.05)，对照组对TGF、PDGF促进作用较芎芍胶囊组、丹参组有统计学意义(P<0.05)。
表1 各组血管生成因子比较(x±s)g/mL
2.2 各组免疫组化评分比较(见表2) 芎芍胶囊组对VEGF、EGF的促进作用较丹参组、对照组有统计学意义(P<0.05)，其中丹参组对FGF的促进作用与芎芍胶囊组、对照组比较均有统计学意义(P<0.05)，对照组对TGF、PDGF促进作用较芎芍胶囊组、丹参组有统计学意义(P<0.05) ......
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