加味芎藭汤含药血清对ICAM-1\VCAM-1和PS 含量的影响(1)
参见附件(12kb)。
摘要：目的 观察加味芎藭汤含药血清对血管内皮细胞分泌细胞间黏附分子(ICAM-1)、血管细胞间黏附分子(VCAM-1)和颗粒膜蛋白(PS)含量的影响。方法 体外培养血管内皮细胞，随机将细胞分为DMSO溶媒对照组，AngⅡ模型组，卡托普利对照组，30%、20%、10%、5%加味芎藭汤含药血清组,MTT法检测细胞的增殖活性，用Elisa法分别检测细胞培养上清中的ICAM-1，VCAM-1，PS的含量。结果 加味芎藭汤含药血清可降低内皮细胞分泌的ICAM-1、VCAM-1，升高内皮细胞分泌的PS。结论 加味芎藭汤对血管内膜的黏附能力具有调节的功效。
关键词:血管内皮细胞；加味芎藭汤；含药血清；大鼠
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1672-1349(2011)07-0838-02
血管内皮细胞的损伤及功能紊乱与高血压、冠心病及糖尿病等多种疾病的发生密切相关，其中，细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1)、血管细胞间黏附分子-1(vascular cellular adhesion molecule-1,VCAM-1)和颗粒膜蛋白(PS)的含量变化与血管内皮细胞损伤密切相关[1]。本实验以AngⅡ建立血管内皮细胞损伤模型，以加味芎藭汤含药血清为干预因素，观察含药血清对血管内皮细胞分泌的ICAM-1、VCAM-1和PS含量的影响，为加味芎藭汤治疗与血管内皮损伤相关联的疾病提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 实验药品 加味芎藭汤中之银杏叶、当归、酒大黄、川芎均由山东中医药大学附属医院中药房提供，并经山东中医药大学中药学院中药鉴定教研室鉴定为正品。血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)由美国Sigma公司提供；卡托普利由山东潍坊制药厂提供，批号：10910005。
1.2 试剂 DMEM干粉培养、胎牛血清(FCS)、过氧化氢(H2O2)、胰蛋白酶，3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)，美国Gibco公司产品；二甲基亚砜(DMSO)，天津市福辰化学试剂厂；酶联免疫吸附法ICAM-1与VCAM-1和PS测定试剂盒购自美国BPB 生物医学有限公司。
1.3 仪器 水套式二氧化碳孵箱，美国Nuaire公司产品；倒置相差显微镜，全自动生化分析仪：AU1000型，日本OLYMPUS公司产品；超净工作台，苏州净化设备公司产品；酶联免疫检测仪，华东电子管厂产品；LX808动力学定量绘图酶标仪,美国宝特原装进口产品。实验用细胞人脐静脉内皮细胞系(ECV-304)，购自山东省医学科学院，由美国组织培养库ATTCCCRI-1998引进)。
1.4 含药血清制备 雄性Wiatar大鼠10只，加味芎藭汤按13.3 g/(kg·d)灌胃给药，连续7 d，于末次给药2 h后，麻醉，取血，无菌分离血清，经56 ℃、30 min灭活后，配置含药血清培养液备用。
1.5 细胞培养与分组 采用胰蛋白酶消化传代血管内皮细胞，倒置相差显微镜下观察细胞形态，采用4～6代细胞用于实验。随机分组。①DMSO溶媒对照组;②AngⅡ组：AngⅡ2×10-7 mol/L；③卡托普利组：AngⅡ2×10-7 mol/L+160 mg/L卡托普利；④30%含药血清组：AngⅡ2×10-7mol/L+30%含药血清；⑤20%含药血清组：AngⅡ2×10-7 mol/L+20%含药血清；⑥10%含药血清组：AngⅡ2×10-7 mol/L+10%含药血清；⑦5%含药血清组：AngⅡ2×10-7mol/L+5%含药血清，继续培养24 h。
1.6 细胞增殖活性测定 将4×104/mL细胞悬液接种于96孔培养板 ......
摘要：目的 观察加味芎藭汤含药血清对血管内皮细胞分泌细胞间黏附分子(ICAM-1)、血管细胞间黏附分子(VCAM-1)和颗粒膜蛋白(PS)含量的影响。方法 体外培养血管内皮细胞，随机将细胞分为DMSO溶媒对照组，AngⅡ模型组，卡托普利对照组，30%、20%、10%、5%加味芎藭汤含药血清组,MTT法检测细胞的增殖活性，用Elisa法分别检测细胞培养上清中的ICAM-1，VCAM-1，PS的含量。结果 加味芎藭汤含药血清可降低内皮细胞分泌的ICAM-1、VCAM-1，升高内皮细胞分泌的PS。结论 加味芎藭汤对血管内膜的黏附能力具有调节的功效。
关键词:血管内皮细胞；加味芎藭汤；含药血清；大鼠
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1672-1349(2011)07-0838-02
血管内皮细胞的损伤及功能紊乱与高血压、冠心病及糖尿病等多种疾病的发生密切相关，其中，细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1)、血管细胞间黏附分子-1(vascular cellular adhesion molecule-1,VCAM-1)和颗粒膜蛋白(PS)的含量变化与血管内皮细胞损伤密切相关[1]。本实验以AngⅡ建立血管内皮细胞损伤模型，以加味芎藭汤含药血清为干预因素，观察含药血清对血管内皮细胞分泌的ICAM-1、VCAM-1和PS含量的影响，为加味芎藭汤治疗与血管内皮损伤相关联的疾病提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 实验药品 加味芎藭汤中之银杏叶、当归、酒大黄、川芎均由山东中医药大学附属医院中药房提供，并经山东中医药大学中药学院中药鉴定教研室鉴定为正品。血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)由美国Sigma公司提供；卡托普利由山东潍坊制药厂提供，批号：10910005。
1.2 试剂 DMEM干粉培养、胎牛血清(FCS)、过氧化氢(H2O2)、胰蛋白酶，3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)，美国Gibco公司产品；二甲基亚砜(DMSO)，天津市福辰化学试剂厂；酶联免疫吸附法ICAM-1与VCAM-1和PS测定试剂盒购自美国BPB 生物医学有限公司。
1.3 仪器 水套式二氧化碳孵箱，美国Nuaire公司产品；倒置相差显微镜，全自动生化分析仪：AU1000型，日本OLYMPUS公司产品；超净工作台，苏州净化设备公司产品；酶联免疫检测仪，华东电子管厂产品；LX808动力学定量绘图酶标仪,美国宝特原装进口产品。实验用细胞人脐静脉内皮细胞系(ECV-304)，购自山东省医学科学院，由美国组织培养库ATTCCCRI-1998引进)。
1.4 含药血清制备 雄性Wiatar大鼠10只，加味芎藭汤按13.3 g/(kg·d)灌胃给药，连续7 d，于末次给药2 h后，麻醉，取血，无菌分离血清，经56 ℃、30 min灭活后，配置含药血清培养液备用。
1.5 细胞培养与分组 采用胰蛋白酶消化传代血管内皮细胞，倒置相差显微镜下观察细胞形态，采用4～6代细胞用于实验。随机分组。①DMSO溶媒对照组;②AngⅡ组：AngⅡ2×10-7 mol/L；③卡托普利组：AngⅡ2×10-7 mol/L+160 mg/L卡托普利；④30%含药血清组：AngⅡ2×10-7mol/L+30%含药血清；⑤20%含药血清组：AngⅡ2×10-7 mol/L+20%含药血清；⑥10%含药血清组：AngⅡ2×10-7 mol/L+10%含药血清；⑦5%含药血清组：AngⅡ2×10-7mol/L+5%含药血清，继续培养24 h。
1.6 细胞增殖活性测定 将4×104/mL细胞悬液接种于96孔培养板 ......
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