大鼠急性脑出血后对重要脏器的影响及外周血核因子-κB表达的研究
参见附件(12kb)。
摘要：目的 观察大鼠急性脑出血后肝、肾、肺功能和形态改变及外周血淋巴细胞核因子-κB活性。方法 采用脑内注射凝固自体动脉血建立大鼠脑出血模型,于24 h 后测定外周血淋巴细胞核因子-κB(NF-κkB)活性，丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、尿素氮(BUN) 和肌酐(Cr) 的水平及血氧饱和度(SaO2)水平,并取肝脏和肺组织固定、切片、HE 染色,光镜观察肝、肺组织的病理形态学改变。结果 大鼠脑出血24 h 后血清中的ALT、AST、BUN 和Cr 含量均有显著增加,NF- κB活性升高，SaO2下降，与假手术对照组比较差异有统计学意义(P<0.05) 。光镜观察发现脑出血大鼠的肝脏及肺脏有炎性反应改变。结论 大鼠急性脑出血后其肝脏、肾脏、肺脏的功能和结构均受到一定损害，外周血淋巴细胞NF- κB表达升高。
关键词：脑出血；大鼠；肝功能；肾功能；肺功能；核因子-κB
中图分类号：R743.3 R285.5 文献标识码：A 文章编号：1672-1349(2011)07-0851-02
急性脑出血患者并发多脏器功能障碍综合征在临床上较常见，可影响患者的预后，是急性脑血管病致死的主要原因之一。目前在外科与创伤领域,动物及临床研究均证实全身炎症反应综合征(systemic inflammatory response syndrome,SIRS)是发展为全身多脏器功能损害(multiple organ dysfunction syndrome,MODS)的必由之路[1]。核因子-κB(nuclear factor kappa B，NF-κB)在全身炎症反应中起着关键的作用[2]。本实验观察大鼠脑出血后肝、肾、肺等脏器功能和病理学改变，及外周血核因子-κB的表达，了解急性脑出血后对上述重要脏器的影响及其与核因子- κB表达的关系。
1 材料与方法
1.1 实验动物及分组 健康雄性SD大鼠20只,体重250 g～ 300 g,由中山医科大学实验动物中心提供。将大鼠随机分为脑出血组、假手术组,每组10只。
1.2 方法
1.2.1 大鼠脑出血模型制作[3] 根据大鼠立体定向图谱确定拟注入的左侧尾状核位置，将大鼠用10%水合氯醛(300 mg/kg)腹腔注射麻醉后，凝固血组大鼠完成立体定向术后从术后从立体定向仪上取下，仰卧位固定，右侧腹股沟备皮，纵行切口，暴露并分离右侧股动脉，结扎远心端，用 1 mL注射器接4.5号头皮外穿刺股动脉抽取100 μL自体动脉血，立即注入更换了针头的50 μL微量注射器内，结扎股动脉近心端，缝合皮肤。血液静置5 min使之充分凝固。微量注射器接套管针将凝固血快速注入靶点内(注射速度20 μL/min)。留针30 min后拔除套管针。假手术组大鼠完成立体定向术及股动脉抽血，但不注血。
1.2.2 核因子-κB活性测定 外周血淋巴细胞分离、涂片，抗 NF-κB-p65单克隆抗体购自 Thermo Scientific公司,工作浓度1∶100。假手术组淋巴细胞涂片作为阳性对照。采用 Envision两步法进行 。结果判定,细胞核上呈现棕黄色为阳性,未见着色细胞者为阴性。每一玻片任选 5个高倍视野(×400),计算阳性细胞百分率(阳性细胞数 /计数细胞总数×100%)。
1.2.3 血清酶及血氧饱和度含量等测定 各组麻醉后24 h,经腹主动脉取血,离心取上清,使用日立公司的全自动生化分析仪，及血气分析仪常规测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)水平及血氧饱和度(SaO2)的水平。
1.2.4 病理形态学观察 取肝肺组织,经10%中性甲醛固定24 h 后,常规石蜡包埋、切片,HE染色。光学显微镜下观察肝脏及肺脏结构形态的改变。
1.3 统计学处理 计量资料以均数±标准差(x±s)表示，采用SPSS 12.0分析,组间比较采用t检验。
2 结 果
2.1 大鼠脑出血模型观察 凝固血组所有10只大鼠清醒后观察其行为改变,均出现右侧肢体偏瘫,旋转爬行或拖步行走等,取脑时尾状核内均可见血肿形成。原发血肿局限在尾状核内,形态较规则,呈椭圆形,占位效应明显，表明脑出血模型制作成功。假手术组大鼠未出现上述神经缺损症状,脑内亦无血肿形成,可排除脑出血。
2.2 大鼠ALT、AST、SaO2、BUN、Cr和NF-κB表达的 大鼠脑出血后24 h 血清中ALT、AST 的含量均明显增高,血氧饱和度下降 ......
摘要：目的 观察大鼠急性脑出血后肝、肾、肺功能和形态改变及外周血淋巴细胞核因子-κB活性。方法 采用脑内注射凝固自体动脉血建立大鼠脑出血模型,于24 h 后测定外周血淋巴细胞核因子-κB(NF-κkB)活性，丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、尿素氮(BUN) 和肌酐(Cr) 的水平及血氧饱和度(SaO2)水平,并取肝脏和肺组织固定、切片、HE 染色,光镜观察肝、肺组织的病理形态学改变。结果 大鼠脑出血24 h 后血清中的ALT、AST、BUN 和Cr 含量均有显著增加,NF- κB活性升高，SaO2下降，与假手术对照组比较差异有统计学意义(P<0.05) 。光镜观察发现脑出血大鼠的肝脏及肺脏有炎性反应改变。结论 大鼠急性脑出血后其肝脏、肾脏、肺脏的功能和结构均受到一定损害，外周血淋巴细胞NF- κB表达升高。
关键词：脑出血；大鼠；肝功能；肾功能；肺功能；核因子-κB
中图分类号：R743.3 R285.5 文献标识码：A 文章编号：1672-1349(2011)07-0851-02
急性脑出血患者并发多脏器功能障碍综合征在临床上较常见，可影响患者的预后，是急性脑血管病致死的主要原因之一。目前在外科与创伤领域,动物及临床研究均证实全身炎症反应综合征(systemic inflammatory response syndrome,SIRS)是发展为全身多脏器功能损害(multiple organ dysfunction syndrome,MODS)的必由之路[1]。核因子-κB(nuclear factor kappa B，NF-κB)在全身炎症反应中起着关键的作用[2]。本实验观察大鼠脑出血后肝、肾、肺等脏器功能和病理学改变，及外周血核因子-κB的表达，了解急性脑出血后对上述重要脏器的影响及其与核因子- κB表达的关系。
1 材料与方法
1.1 实验动物及分组 健康雄性SD大鼠20只,体重250 g～ 300 g,由中山医科大学实验动物中心提供。将大鼠随机分为脑出血组、假手术组,每组10只。
1.2 方法
1.2.1 大鼠脑出血模型制作[3] 根据大鼠立体定向图谱确定拟注入的左侧尾状核位置，将大鼠用10%水合氯醛(300 mg/kg)腹腔注射麻醉后，凝固血组大鼠完成立体定向术后从术后从立体定向仪上取下，仰卧位固定，右侧腹股沟备皮，纵行切口，暴露并分离右侧股动脉，结扎远心端，用 1 mL注射器接4.5号头皮外穿刺股动脉抽取100 μL自体动脉血，立即注入更换了针头的50 μL微量注射器内，结扎股动脉近心端，缝合皮肤。血液静置5 min使之充分凝固。微量注射器接套管针将凝固血快速注入靶点内(注射速度20 μL/min)。留针30 min后拔除套管针。假手术组大鼠完成立体定向术及股动脉抽血，但不注血。
1.2.2 核因子-κB活性测定 外周血淋巴细胞分离、涂片，抗 NF-κB-p65单克隆抗体购自 Thermo Scientific公司,工作浓度1∶100。假手术组淋巴细胞涂片作为阳性对照。采用 Envision两步法进行 。结果判定,细胞核上呈现棕黄色为阳性,未见着色细胞者为阴性。每一玻片任选 5个高倍视野(×400),计算阳性细胞百分率(阳性细胞数 /计数细胞总数×100%)。
1.2.3 血清酶及血氧饱和度含量等测定 各组麻醉后24 h,经腹主动脉取血,离心取上清,使用日立公司的全自动生化分析仪，及血气分析仪常规测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)水平及血氧饱和度(SaO2)的水平。
1.2.4 病理形态学观察 取肝肺组织,经10%中性甲醛固定24 h 后,常规石蜡包埋、切片,HE染色。光学显微镜下观察肝脏及肺脏结构形态的改变。
1.3 统计学处理 计量资料以均数±标准差(x±s)表示，采用SPSS 12.0分析,组间比较采用t检验。
2 结 果
2.1 大鼠脑出血模型观察 凝固血组所有10只大鼠清醒后观察其行为改变,均出现右侧肢体偏瘫,旋转爬行或拖步行走等,取脑时尾状核内均可见血肿形成。原发血肿局限在尾状核内,形态较规则,呈椭圆形,占位效应明显，表明脑出血模型制作成功。假手术组大鼠未出现上述神经缺损症状,脑内亦无血肿形成,可排除脑出血。
2.2 大鼠ALT、AST、SaO2、BUN、Cr和NF-κB表达的 大鼠脑出血后24 h 血清中ALT、AST 的含量均明显增高,血氧饱和度下降 ......
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