安定在保存血液中的分解动力学研究
参见附件(12kb)。
中图分类号：R971.3 文献标识码：A 文章编号：1672-1349(2011)07-0858-03
安定是临床上常用的镇静催眠药,但长期服用或大量服用均可引起中毒,安定中毒的案例时有报道[1-3]。本研究建立安定灌胃中毒致死犬的动物模型，研究安定在保存犬血液中的分解动力学。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 仪器和试剂 Trace DSQ气相色谱-质谱联用仪，美国Finnigan公司；岛津2010GC气相色谱仪，日本岛津公司；安定标准品(购于公安部二所)；内标：SKF525(中国标准技术开发公司)；其余试剂为国产分析纯。
1.1.2 实验动物 本地杂种犬6只，15 kg～20 kg，雄性，山西医科大学实验动物中心提供。
1.2 实验方法
1.2.1 溶液配制 安定、内标储备液的配制:分别精密称取安定、丙基解痉素(SKF525A，内标物)标准品适量，用无水乙醇溶解并定量稀释制成1.0 mg/mL的标准储备液。
1.2.2 色谱分析条件 气相色谱/质谱联用分析条件：DB-5MS(30 m×0.25 mm×0.25 mm)毛细管柱；载气为高纯氦气，恒流模式，流速1.0 mL/min；进样口温度250 ℃；柱温为程序升温：200 ℃(1 min)→20 ℃/min→280 ℃(6 min)；传输线温度250 ℃；电子轰击电离源(EI)，电子能量70 eV，离子源温度250 ℃；自动调谐方式，发射电流强度100 μA；扫描起始时间4 min，扫描范围50 amu～650 amu；分流进样，分流比为10∶1。气相色谱分析条件：DB-5(30 m×0.25 mm×0.25 mm)毛细管柱；载气为高纯氮气，恒压模式，压力150 kPa；进样口温度：250 ℃；柱温:200 ℃(1 min)→20 ℃/min→280 ℃(6 min)；NPD检测器，温度 300℃；不分流进样。
1.2.3 提取分离与检测 血液1 mL，加水3 mL，加入内标物SKF52510 μg，硼酸缓冲溶液调pH为10，5 mL乙醚萃取，振荡10 min，离心，取上清液4 mL置于干燥离心管中。乙醚重新萃取一次，合并有机相，40℃恒温水浴中挥干。残渣加20 μL乙醇定容，取1 μL进样。保留时间结合特征离子峰定性，内标法和标准曲线法(气相色谱)定量。
1.2.4 保存犬血中的分解动力学 雄性犬6只，插胃管，2 min内注入2 LD50剂量安定[4]，每只犬血分4等份置于20 ℃、4℃、-20 ℃、20 ℃(加氟化钠至浓度为1%)中，于0、7 d、14 d、28 d，60 d、90 d、150 d、210 d检测血液中安定含量。采用WinNorLin药代动力学软件处理平均药物浓度，拟合分解动力学方程，计算分解半衰期。
1.3 统计学处理 数据以均数±标准差(x±s)表示，用SPSS 11.5软件进行方差分析和t检验。
2 结 果
2.1 GC和GC/MS检测 安定与内标物及内源性杂质分离良好。详见图1～2。
2.2 工作曲线 取空白血分别添加安定0.1、0.2、0.4、0.8、1.0、2.0、4.0、8.0、12.0、24.0、32.0、48.0 μg按前述2.1方法提取测定。所建立的血中安定检测工作曲线、线性范围、相关系数、最低检出限分别为Y3.0519X-2.8942(X为安定和内标物峰面积比值； Y为安定含量，μg/mL或μg/g)、0.1～32 μg/mL、0.998 8 μg/mL、0.05 μg/mL。
2.3 回收率及精密度 精密吸取15份空白全血1 mL，分为3组，分别加水3 mL，混匀。每组分别加入安定0.5、1.0、4.0 μg，按2.1 全血样品处理项方法处理测定。同时取1 d内5次测定结果计算日内相对标准差，以3 d内5次测定结果计算日间相对标准差。详见表1。
表1 安定提取回收率及精密度(n5)
2.4 分解动力学研究
2.4.1 温度对保存血液中安定浓度的影响(见表2、表3)
2.4.2 分解动力学参数和方程 采用WinNorLin药代动力学软件处理平均药物浓度-时间数据。其分解符合一级动力学过程，可用CtC1e-αt+C2e-βt(Ct为时间t测得的含量；C1、C2表示初始含量；t表示时间，单位：天；α、β为一级分解速率常数)。分解动力学方程和参数见表4。根据此方程计算的理论值与实测值符合情况见表4。
3 结 论
苯骈二氮杂卓类药物在生物检材中的稳定性视母体药物及其代谢物的结构、存储条件和防腐剂的添加有关[6] ......
中图分类号：R971.3 文献标识码：A 文章编号：1672-1349(2011)07-0858-03
安定是临床上常用的镇静催眠药,但长期服用或大量服用均可引起中毒,安定中毒的案例时有报道[1-3]。本研究建立安定灌胃中毒致死犬的动物模型，研究安定在保存犬血液中的分解动力学。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 仪器和试剂 Trace DSQ气相色谱-质谱联用仪，美国Finnigan公司；岛津2010GC气相色谱仪，日本岛津公司；安定标准品(购于公安部二所)；内标：SKF525(中国标准技术开发公司)；其余试剂为国产分析纯。
1.1.2 实验动物 本地杂种犬6只，15 kg～20 kg，雄性，山西医科大学实验动物中心提供。
1.2 实验方法
1.2.1 溶液配制 安定、内标储备液的配制:分别精密称取安定、丙基解痉素(SKF525A，内标物)标准品适量，用无水乙醇溶解并定量稀释制成1.0 mg/mL的标准储备液。
1.2.2 色谱分析条件 气相色谱/质谱联用分析条件：DB-5MS(30 m×0.25 mm×0.25 mm)毛细管柱；载气为高纯氦气，恒流模式，流速1.0 mL/min；进样口温度250 ℃；柱温为程序升温：200 ℃(1 min)→20 ℃/min→280 ℃(6 min)；传输线温度250 ℃；电子轰击电离源(EI)，电子能量70 eV，离子源温度250 ℃；自动调谐方式，发射电流强度100 μA；扫描起始时间4 min，扫描范围50 amu～650 amu；分流进样，分流比为10∶1。气相色谱分析条件：DB-5(30 m×0.25 mm×0.25 mm)毛细管柱；载气为高纯氮气，恒压模式，压力150 kPa；进样口温度：250 ℃；柱温:200 ℃(1 min)→20 ℃/min→280 ℃(6 min)；NPD检测器，温度 300℃；不分流进样。
1.2.3 提取分离与检测 血液1 mL，加水3 mL，加入内标物SKF52510 μg，硼酸缓冲溶液调pH为10，5 mL乙醚萃取，振荡10 min，离心，取上清液4 mL置于干燥离心管中。乙醚重新萃取一次，合并有机相，40℃恒温水浴中挥干。残渣加20 μL乙醇定容，取1 μL进样。保留时间结合特征离子峰定性，内标法和标准曲线法(气相色谱)定量。
1.2.4 保存犬血中的分解动力学 雄性犬6只，插胃管，2 min内注入2 LD50剂量安定[4]，每只犬血分4等份置于20 ℃、4℃、-20 ℃、20 ℃(加氟化钠至浓度为1%)中，于0、7 d、14 d、28 d，60 d、90 d、150 d、210 d检测血液中安定含量。采用WinNorLin药代动力学软件处理平均药物浓度，拟合分解动力学方程，计算分解半衰期。
1.3 统计学处理 数据以均数±标准差(x±s)表示，用SPSS 11.5软件进行方差分析和t检验。
2 结 果
2.1 GC和GC/MS检测 安定与内标物及内源性杂质分离良好。详见图1～2。
2.2 工作曲线 取空白血分别添加安定0.1、0.2、0.4、0.8、1.0、2.0、4.0、8.0、12.0、24.0、32.0、48.0 μg按前述2.1方法提取测定。所建立的血中安定检测工作曲线、线性范围、相关系数、最低检出限分别为Y3.0519X-2.8942(X为安定和内标物峰面积比值； Y为安定含量，μg/mL或μg/g)、0.1～32 μg/mL、0.998 8 μg/mL、0.05 μg/mL。
2.3 回收率及精密度 精密吸取15份空白全血1 mL，分为3组，分别加水3 mL，混匀。每组分别加入安定0.5、1.0、4.0 μg，按2.1 全血样品处理项方法处理测定。同时取1 d内5次测定结果计算日内相对标准差，以3 d内5次测定结果计算日间相对标准差。详见表1。
表1 安定提取回收率及精密度(n5)
2.4 分解动力学研究
2.4.1 温度对保存血液中安定浓度的影响(见表2、表3)
2.4.2 分解动力学参数和方程 采用WinNorLin药代动力学软件处理平均药物浓度-时间数据。其分解符合一级动力学过程，可用CtC1e-αt+C2e-βt(Ct为时间t测得的含量；C1、C2表示初始含量；t表示时间，单位：天；α、β为一级分解速率常数)。分解动力学方程和参数见表4。根据此方程计算的理论值与实测值符合情况见表4。
3 结 论
苯骈二氮杂卓类药物在生物检材中的稳定性视母体药物及其代谢物的结构、存储条件和防腐剂的添加有关[6] ......
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