黄芪皂甙Ⅳ联合BMSCs移植对大鼠脑缺血再灌注海马神经细胞凋亡及Livin\Caspase-9蛋白的影响(3)
参见附件(12kb)。
图1 Western blot 检测各组Livin和Caspase-9蛋白表达
表2 海马区Livin 、Caspase-9蛋白相对表达(x±s)
3 讨 论
骨髓间充质干细胞作为成体干细胞的一种具有多向分化、增殖迅速、长期存活和低免疫原性的特点，可用于神经损伤时组织工程化的种子细胞[6]。Chopp等[7]将BMSCs注入脑缺血的大鼠体内，在数天及数周后BMSCs已移入缺血侧皮质，并分化为神经细胞及胶质细胞，修复脑缺血后的神经功能缺损。本实验于造模72 h后免疫荧光观察可见海马区有大量存活的PKH-26标记的BMSCs,证实了静脉移植的BMSCs能够通过血脑屏障进入宿主脑内,迁移至缺血性损伤区域发挥作用。
黄芪是一种被广泛应用于治疗缺血性脑血管病的传统中药，具有补气升阳、利水退肿的功效[4]。临床调查显示其治疗急性脑梗死安全且有效[8]。黄芪皂甙Ⅳ是黄芪的主要活性成分，有研究显示黄芪皂甙Ⅳ具有降压[9] 、调节机体免疫功能[10]、抗炎症[11]、镇静镇痛[12]、神经保护[13]、降低病毒活性[14]等多种药理作用。尽管黄芪皂甙Ⅳ在病理生理条件下能够发挥多种作用，但对于黄芪皂甙Ⅳ联合BNSCs对脑缺血再灌注损伤的研究则未见相关报道。本实验中，联合组的神经功能恢复明显优于BMSCs组，提示黄芪皂甙Ⅳ可增强BMSCs移植治疗大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用，这为黄芪皂甙Ⅳ联合BNSCs治疗缺血性脑损伤提供了行为学上的实验依据。
细胞凋亡在缺血性脑损伤的发生发展中起重要作用，天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白激酶家族是细胞凋亡过程中最重要的蛋白酶，其中Caspase-9是细胞凋亡线粒体通路中最重要的启动蛋白酶。线粒体通路是指氧自由基、钙超载等凋亡刺激因素使线粒体通透性增加，线粒体跨膜电位下降，释放细胞色素C(CytoC)，CytoC主要激活Caspase-9进而也激活下游的Caspase-3，诱导细胞凋亡[15]。而Livin作为一个新的凋亡抑制蛋白能够作用于线粒体途径，可以直接与Caspase-9前体蛋白(proCaspase-9)和其激活形式结合从而抑制其活性，还可以直接结合并抑制Caspase-3的活性，阻断他们依次裂解激活，同时阻断了Caspase-3对proCaspase- 9的反馈激活，抑制细胞的凋亡[16,17]。本研究发现，假手术组大鼠脑组织未见细胞凋亡，亦未有Caspase-9和Livin阳性表达。模型组可见到海马区细胞凋亡，Caspase-9显著表达(P<0.05)，且与凋亡分布一致，Livin未见表达。与以往的研究结果基本一致[18]。进一步观察发现，与模型组比较组均能上调Livin蛋白表达，下调Caspase-9蛋白表达，降低神经元细胞凋亡数。而联合组作用较BMSCs组更为显著(P<0.05)，提示BMSCs与黄芪皂甙Ⅳ在抑制细胞凋亡线粒体通路时可发挥协同作用，但黄芪皂甙Ⅳ通过怎样具体途径促进BMSCs发挥神经保护作用尚待进一步探讨 ......
图1 Western blot 检测各组Livin和Caspase-9蛋白表达
表2 海马区Livin 、Caspase-9蛋白相对表达(x±s)
3 讨 论
骨髓间充质干细胞作为成体干细胞的一种具有多向分化、增殖迅速、长期存活和低免疫原性的特点，可用于神经损伤时组织工程化的种子细胞[6]。Chopp等[7]将BMSCs注入脑缺血的大鼠体内，在数天及数周后BMSCs已移入缺血侧皮质，并分化为神经细胞及胶质细胞，修复脑缺血后的神经功能缺损。本实验于造模72 h后免疫荧光观察可见海马区有大量存活的PKH-26标记的BMSCs,证实了静脉移植的BMSCs能够通过血脑屏障进入宿主脑内,迁移至缺血性损伤区域发挥作用。
黄芪是一种被广泛应用于治疗缺血性脑血管病的传统中药，具有补气升阳、利水退肿的功效[4]。临床调查显示其治疗急性脑梗死安全且有效[8]。黄芪皂甙Ⅳ是黄芪的主要活性成分，有研究显示黄芪皂甙Ⅳ具有降压[9] 、调节机体免疫功能[10]、抗炎症[11]、镇静镇痛[12]、神经保护[13]、降低病毒活性[14]等多种药理作用。尽管黄芪皂甙Ⅳ在病理生理条件下能够发挥多种作用，但对于黄芪皂甙Ⅳ联合BNSCs对脑缺血再灌注损伤的研究则未见相关报道。本实验中，联合组的神经功能恢复明显优于BMSCs组，提示黄芪皂甙Ⅳ可增强BMSCs移植治疗大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用，这为黄芪皂甙Ⅳ联合BNSCs治疗缺血性脑损伤提供了行为学上的实验依据。
细胞凋亡在缺血性脑损伤的发生发展中起重要作用，天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白激酶家族是细胞凋亡过程中最重要的蛋白酶，其中Caspase-9是细胞凋亡线粒体通路中最重要的启动蛋白酶。线粒体通路是指氧自由基、钙超载等凋亡刺激因素使线粒体通透性增加，线粒体跨膜电位下降，释放细胞色素C(CytoC)，CytoC主要激活Caspase-9进而也激活下游的Caspase-3，诱导细胞凋亡[15]。而Livin作为一个新的凋亡抑制蛋白能够作用于线粒体途径，可以直接与Caspase-9前体蛋白(proCaspase-9)和其激活形式结合从而抑制其活性，还可以直接结合并抑制Caspase-3的活性，阻断他们依次裂解激活，同时阻断了Caspase-3对proCaspase- 9的反馈激活，抑制细胞的凋亡[16,17]。本研究发现，假手术组大鼠脑组织未见细胞凋亡，亦未有Caspase-9和Livin阳性表达。模型组可见到海马区细胞凋亡，Caspase-9显著表达(P<0.05)，且与凋亡分布一致，Livin未见表达。与以往的研究结果基本一致[18]。进一步观察发现，与模型组比较组均能上调Livin蛋白表达，下调Caspase-9蛋白表达，降低神经元细胞凋亡数。而联合组作用较BMSCs组更为显著(P<0.05)，提示BMSCs与黄芪皂甙Ⅳ在抑制细胞凋亡线粒体通路时可发挥协同作用，但黄芪皂甙Ⅳ通过怎样具体途径促进BMSCs发挥神经保护作用尚待进一步探讨 ......
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