舒芬太尼后处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤保护作用的实验研究(1)
摘要：目的观察不同剂量舒芬太尼(SFT)后处理的心肌保护作用。方法 健康SD雄性大鼠24只，体重250 g～300 g，随机分为假手术组、缺血再灌注组、舒芬太尼后处理低剂量组、舒芬太尼后处理高剂量组。采用结扎左冠状动脉前降支30 min再灌注120 min的方法制备心肌缺血再灌注模型。假手术组完成模型仅穿线，不结扎；舒芬太尼后处理组在缺血再灌前2 min分别给予上述2个剂量，假手术组穿线后腹腔注射生理盐水1 mL，缺血再灌注组缺血再灌注前两分钟腹腔注射生理盐水1 mL，舒芬太尼后处理低、高剂量组组分别腹腔注射舒芬太尼稀释液1 mL,2 μg/kg、10 μg/kg。于实验结束时制做心肌组织匀浆，检测心肌组织中的超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量；于实验结束时右心室采血常温离心分离检测血清心肌酶(CK)、血清乳酸脱氢酶(LDH)、血清(NO)含量，取左心室切5块，采用氯化硝基四氮唑蓝(N
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BT)染色法区分正常和梗死区，用梗死区重量占左心室重量百分比观测梗死程度。结果 与假手术组比较，缺血再灌注组心肌组织SOD活性下降，MDA增高,血清CK及LDH水平增高，血清NO含量减少；与缺血再灌注模型组比较，舒芬太尼后处理组，心肌组织SOD活性升高，MDA降低，血清CK及LDH释放减少；血清NO含量增加；再灌注心律失常明显减少；心肌梗死程度降低；以舒芬太尼后处理高剂量组更为明显。结论 舒芬太尼后处理能够减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤的程度,并且呈剂量依赖性。
关键词：舒芬太尼；后处理；心肌缺血再灌注损伤
中图分类号：R542.2 R256.2 文献标识码：A 文章编号：1672
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1349(2011)09
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1672
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1349(2011)08
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心肌缺血后处理是于再灌注早期对缺血心肌给予反复、短暂的再灌注、缺血，以减轻再灌注损伤,但临床上缺血后处理的实施有一定困难。药物后处理是用药物模拟缺血后处理，可达到与其相似的心肌保护作用，临床易于实施。研究表明，阿片类药物吗啡既有早期心肌保护作用，又有延迟性心肌保护作用[1
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5]。吗啡后处理减轻心肌缺血再灌注损伤已见报道[6
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8]。舒芬太尼(sufentanil,SFT)是一种新型阿片类药物，近几年广泛应用于心血管手术麻醉，舒芬太尼后处理是否具有心肌保护作用鲜有报道。本研究拟评价舒芬太尼对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响，为临床提供参考。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验动物 健康SD雄性成年大鼠24只，体重250 g～300 g，由辽宁医学院动物实验中心提供。
1.1.2 实验药物与仪器 注射用舒芬太尼针剂：湖北宜昌人福药业有限责任公司;NO、SOD、MDA试剂盒： 购于南京建成生物工程研究所;DH
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150动物呼吸机；DY
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89电玻璃匀浆器；UV751GD紫外/可见分光光度计；JY92
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Ⅱ超声波细胞粉碎机；TSHZ
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A台式水浴恒温振荡器；TGLL
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18g台式高速冷冻离心机。
1.2 方法
1.2.1 实验动物分组及处理 将24只健康SD大鼠随机分为4组，每组6只。假手术组：只穿线不结扎，穿线后腹腔注射生理盐水1 mL。缺血再灌注组：缺血30 min，再灌注120 min。再灌注前2 min腹腔注射生理盐水1 mL。舒芬太尼后处理低剂量组(SFT
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2组)：缺血30 min，再灌注120 min，再灌注前2 min腹腔注射舒芬太尼稀释液1 mL，2 μg/kg。舒芬太尼后处理高剂量组(SFT
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10组)：缺血30 min，再灌注120 min，再灌注前2 min腹腔注射舒芬太尼稀释液1 mL，10 μg/kg。
1.2.2 大鼠心肌缺血再灌注损伤模型制备 将大鼠以乌拉坦1 g/kg腹腔注射麻醉，固定大鼠四肢及头部于实验台上，将心电图机电极插入大鼠四肢皮下，记录正常Ⅱ导联心电图。气管插管，连接动物呼吸机。沿前正中线剪开皮肤，分离皮下组织、肌肉，位于胸骨左缘第3、4肋间开胸，剪开心包，暴露心脏，在肺动脉圆锥和左心耳连线中点下方约2 mm处进针，将一根塑料管垫于结扎线与血管之间，拉紧结扎线，使冠状动脉前降支闭塞。缺血30 min松解结扎线，再灌注120 min，同时记录肢体Ⅱ导联心电图，观察ST段抬高及恢复，以及心律失常情况作为判断冠状动脉断流及再灌注的指标。
1.2.3 标本采集 实验结束后右心取血5 mL，4 ℃,3 500 r/min离心15 min，分离血浆，放-80 ℃冰箱保存，待测心肌酶磷酸肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)和NO。取血后，取心脏即以冰盐水冲洗，除去血液。每组中3只取左心室，采用硝基四氮唑蓝(N
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BT)染色法区分正常和梗死区，测定梗死区重量百分比。另3只大鼠取左心室制备匀浆，测定超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)。
1.2.4 心肌组织匀浆的制备 再灌120 min后立即处死大鼠，取出心脏，立即在冰冷生理盐水中漂洗，除去血液，保持酶活性，除去右心及心房，留取左心室，滤纸吸干，置-80 ℃冰箱中保存。测定指标时将所有标本取出，用移液管吸取生理盐水(按9∶1),加入有组织的塑料离心管，用眼科小剪尽快将组织块剪碎，然后用捣碎机将组织捣碎，离心，取上清液备用。
1.2.5 心肌梗死范围测定 再灌注2 h取血后，摘取心脏剪去心房和右心室，沿房室环方向从心尖至心底切成约2 mm厚的组织块，置于0.5 g/dL氯化硝基四氮唑蓝母液的10倍稀释液中染色(37 ℃，恒温水浴振荡中)15 min。然后，观察心肌坏死，拍照。称取左室重量，再沿坏死边缘切去坏死部分心肌并称重，以坏死心肌与全左心室心肌重量的百分比表示心肌梗死百分比。, 百拇医药(荣彦生)
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BT)染色法区分正常和梗死区，用梗死区重量占左心室重量百分比观测梗死程度。结果 与假手术组比较，缺血再灌注组心肌组织SOD活性下降，MDA增高,血清CK及LDH水平增高，血清NO含量减少；与缺血再灌注模型组比较，舒芬太尼后处理组，心肌组织SOD活性升高，MDA降低，血清CK及LDH释放减少；血清NO含量增加；再灌注心律失常明显减少；心肌梗死程度降低；以舒芬太尼后处理高剂量组更为明显。结论 舒芬太尼后处理能够减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤的程度,并且呈剂量依赖性。
关键词：舒芬太尼；后处理；心肌缺血再灌注损伤
中图分类号：R542.2 R256.2 文献标识码：A 文章编号：1672
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心肌缺血后处理是于再灌注早期对缺血心肌给予反复、短暂的再灌注、缺血，以减轻再灌注损伤,但临床上缺血后处理的实施有一定困难。药物后处理是用药物模拟缺血后处理，可达到与其相似的心肌保护作用，临床易于实施。研究表明，阿片类药物吗啡既有早期心肌保护作用，又有延迟性心肌保护作用[1
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5]。吗啡后处理减轻心肌缺血再灌注损伤已见报道[6
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8]。舒芬太尼(sufentanil,SFT)是一种新型阿片类药物，近几年广泛应用于心血管手术麻醉，舒芬太尼后处理是否具有心肌保护作用鲜有报道。本研究拟评价舒芬太尼对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响，为临床提供参考。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验动物 健康SD雄性成年大鼠24只，体重250 g～300 g，由辽宁医学院动物实验中心提供。
1.1.2 实验药物与仪器 注射用舒芬太尼针剂：湖北宜昌人福药业有限责任公司;NO、SOD、MDA试剂盒： 购于南京建成生物工程研究所;DH
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150动物呼吸机；DY
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89电玻璃匀浆器；UV751GD紫外/可见分光光度计；JY92
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Ⅱ超声波细胞粉碎机；TSHZ
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A台式水浴恒温振荡器；TGLL
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18g台式高速冷冻离心机。
1.2 方法
1.2.1 实验动物分组及处理 将24只健康SD大鼠随机分为4组，每组6只。假手术组：只穿线不结扎，穿线后腹腔注射生理盐水1 mL。缺血再灌注组：缺血30 min，再灌注120 min。再灌注前2 min腹腔注射生理盐水1 mL。舒芬太尼后处理低剂量组(SFT
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2组)：缺血30 min，再灌注120 min，再灌注前2 min腹腔注射舒芬太尼稀释液1 mL，2 μg/kg。舒芬太尼后处理高剂量组(SFT
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10组)：缺血30 min，再灌注120 min，再灌注前2 min腹腔注射舒芬太尼稀释液1 mL，10 μg/kg。
1.2.2 大鼠心肌缺血再灌注损伤模型制备 将大鼠以乌拉坦1 g/kg腹腔注射麻醉，固定大鼠四肢及头部于实验台上，将心电图机电极插入大鼠四肢皮下，记录正常Ⅱ导联心电图。气管插管，连接动物呼吸机。沿前正中线剪开皮肤，分离皮下组织、肌肉，位于胸骨左缘第3、4肋间开胸，剪开心包，暴露心脏，在肺动脉圆锥和左心耳连线中点下方约2 mm处进针，将一根塑料管垫于结扎线与血管之间，拉紧结扎线，使冠状动脉前降支闭塞。缺血30 min松解结扎线，再灌注120 min，同时记录肢体Ⅱ导联心电图，观察ST段抬高及恢复，以及心律失常情况作为判断冠状动脉断流及再灌注的指标。
1.2.3 标本采集 实验结束后右心取血5 mL，4 ℃,3 500 r/min离心15 min，分离血浆，放-80 ℃冰箱保存，待测心肌酶磷酸肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)和NO。取血后，取心脏即以冰盐水冲洗，除去血液。每组中3只取左心室，采用硝基四氮唑蓝(N
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BT)染色法区分正常和梗死区，测定梗死区重量百分比。另3只大鼠取左心室制备匀浆，测定超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)。
1.2.4 心肌组织匀浆的制备 再灌120 min后立即处死大鼠，取出心脏，立即在冰冷生理盐水中漂洗，除去血液，保持酶活性，除去右心及心房，留取左心室，滤纸吸干，置-80 ℃冰箱中保存。测定指标时将所有标本取出，用移液管吸取生理盐水(按9∶1),加入有组织的塑料离心管，用眼科小剪尽快将组织块剪碎，然后用捣碎机将组织捣碎，离心，取上清液备用。
1.2.5 心肌梗死范围测定 再灌注2 h取血后，摘取心脏剪去心房和右心室，沿房室环方向从心尖至心底切成约2 mm厚的组织块，置于0.5 g/dL氯化硝基四氮唑蓝母液的10倍稀释液中染色(37 ℃，恒温水浴振荡中)15 min。然后，观察心肌坏死，拍照。称取左室重量，再沿坏死边缘切去坏死部分心肌并称重，以坏死心肌与全左心室心肌重量的百分比表示心肌梗死百分比。, 百拇医药(荣彦生)