CRELD1基因在汉族完全型房室间隔缺损患儿心肌组织表达情况的初步分析(2)
参见附件。
1.3.4 芯片杂交、清洗、染色、扫描 博奥生物公司提供的Affymetrix人U133+2.0芯片，含有54 000多个基因探针，包含了Actin和GAPDH等作为RNA样本的质控对照。取5 μg～10 μg总RNA反转录得到cDNA，体外转录合成生物素标记的cRNA，并将其纯化定量后片段化处理(35～200 bp)。将预杂交液加入到晶芯人类全基因组寡核苷酸微阵列芯片服务V2.0芯片中，杂交炉中45 ℃预杂交10 min，取出预杂交液，加入等体积的杂交液及生物素标记cRNA 45 ℃杂交16 h。从杂交炉中取
出芯片，加入洗脱液和染色液各组分在全自动的洗脱染色工作站(fluidics station 400)中完成洗脱和染色的步骤。用扫描仪(gene chip scanner)扫描芯片，获取基因表达的荧光信号强度值，用预先选定的内参照基因信号进行校正。计算两组荧光信号强度的比值。差异基因筛选标准：Fold Change(倍数变化值)≤0.5或≥2并且q-value(变化趋势的信度判断)≤5%。所有基因均进行基因表达的检测。
1.4 数据的提取及分析 使用AGCC软件(Affymetrix GeneChip Command Console Software)将芯片的荧光扫描图像保存成DAT文件并进行分析，用Cluster和MAS软件对数据进行处理。
2 结 果
对5对样本进行检测，共扫描约40 000个基因，对于CRELD1基因，其在两组的基因表达情况近似，Fold Change为1.095，q-value为100%，差异无统计学意义。
3 讨 论
心脏发育是一个极其复杂的过程，其从中胚层细胞分化、线性心管形成至最终四腔心室形成，受多条信号通路严密而精确的调控 ......
1.3.4 芯片杂交、清洗、染色、扫描 博奥生物公司提供的Affymetrix人U133+2.0芯片，含有54 000多个基因探针，包含了Actin和GAPDH等作为RNA样本的质控对照。取5 μg～10 μg总RNA反转录得到cDNA，体外转录合成生物素标记的cRNA，并将其纯化定量后片段化处理(35～200 bp)。将预杂交液加入到晶芯人类全基因组寡核苷酸微阵列芯片服务V2.0芯片中，杂交炉中45 ℃预杂交10 min，取出预杂交液，加入等体积的杂交液及生物素标记cRNA 45 ℃杂交16 h。从杂交炉中取
出芯片，加入洗脱液和染色液各组分在全自动的洗脱染色工作站(fluidics station 400)中完成洗脱和染色的步骤。用扫描仪(gene chip scanner)扫描芯片，获取基因表达的荧光信号强度值，用预先选定的内参照基因信号进行校正。计算两组荧光信号强度的比值。差异基因筛选标准：Fold Change(倍数变化值)≤0.5或≥2并且q-value(变化趋势的信度判断)≤5%。所有基因均进行基因表达的检测。
1.4 数据的提取及分析 使用AGCC软件(Affymetrix GeneChip Command Console Software)将芯片的荧光扫描图像保存成DAT文件并进行分析，用Cluster和MAS软件对数据进行处理。
2 结 果
对5对样本进行检测，共扫描约40 000个基因，对于CRELD1基因，其在两组的基因表达情况近似，Fold Change为1.095，q-value为100%，差异无统计学意义。
3 讨 论
心脏发育是一个极其复杂的过程，其从中胚层细胞分化、线性心管形成至最终四腔心室形成，受多条信号通路严密而精确的调控 ......
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