大针手法针刺督脉对癫痫大鼠海马神经细胞核转录因子—κB表达的影响(3)
参见附件。
1.3.5 免疫组化染色 切片常规脱蜡至水，3%双氧水室温下作用10 min后，以蒸馏水冲洗3次，每次30 s，滴加复合消化液，室温下作用10 min，以蒸馏水冲洗3次，每次30 s，滴加正常山羊血清封闭液室温20 min，甩去多余液体，吸水纸吸取多余水分，滴加兔抗鼠NF-κB多克隆抗体(1∶50)，4 ℃过夜；取出后自然复温30 min，PBS(pH7.4)冲洗3次，每次5 min；滴加生物素标记山羊抗兔IgG(1∶100)，37 ℃孵育20 min，PBS(pH7.4)冲洗3次，每次3 min；滴加辣根酶标记链霉卵白素工作液(1∶100)，37 ℃孵育20 min，PBS(pH7.4)冲洗3次，每次3 min；DAB显色：使用DAB显色试剂盒内AB试剂各一滴，混合后加至切片。室温下显色，镜下控制反应时间， 约5 min～20 min。然后用蒸馏水充分冲洗。苏木素复染。乙醇梯度脱水(70%乙醇，80%乙醇，90%乙醇，100%乙醇，每级5 min)。二甲苯透明5 min，中性树胶封片，晾干即可。每张切片测5个视野，以人机交互方式，由计算机计算出每个视野的NF-κB P65阳性细胞数及平均光密度，取其平均值。计算机图像处理系统由CMOS及多功能真彩色细胞图像分析管理系统组成。
1.3.6 主要观察指标 各组大鼠造模过程中行为学变化；各组大鼠海马神经细胞病理改变；各组大鼠海马神经NF-κB P65表达的变化。
1.4 统计学处理 采用SPSS17.0 统计软件对NF-κB P65阳性细胞数进行统计学分析。实验数据以均数±标准差(x±s)表示，采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结 果
2.1 各组大鼠行为学观察 A组大鼠腹腔注射生理盐水后，行为活动无异常，无死亡。B组和C组大鼠腹腔注射氯化锂(3 mmol/kg)后，所有大鼠行为活动均无异常，24 h后，腹腔注射匹鲁卡品(30 mg/kg ......
1.3.5 免疫组化染色 切片常规脱蜡至水，3%双氧水室温下作用10 min后，以蒸馏水冲洗3次，每次30 s，滴加复合消化液，室温下作用10 min，以蒸馏水冲洗3次，每次30 s，滴加正常山羊血清封闭液室温20 min，甩去多余液体，吸水纸吸取多余水分，滴加兔抗鼠NF-κB多克隆抗体(1∶50)，4 ℃过夜；取出后自然复温30 min，PBS(pH7.4)冲洗3次，每次5 min；滴加生物素标记山羊抗兔IgG(1∶100)，37 ℃孵育20 min，PBS(pH7.4)冲洗3次，每次3 min；滴加辣根酶标记链霉卵白素工作液(1∶100)，37 ℃孵育20 min，PBS(pH7.4)冲洗3次，每次3 min；DAB显色：使用DAB显色试剂盒内AB试剂各一滴，混合后加至切片。室温下显色，镜下控制反应时间， 约5 min～20 min。然后用蒸馏水充分冲洗。苏木素复染。乙醇梯度脱水(70%乙醇，80%乙醇，90%乙醇，100%乙醇，每级5 min)。二甲苯透明5 min，中性树胶封片，晾干即可。每张切片测5个视野，以人机交互方式，由计算机计算出每个视野的NF-κB P65阳性细胞数及平均光密度，取其平均值。计算机图像处理系统由CMOS及多功能真彩色细胞图像分析管理系统组成。
1.3.6 主要观察指标 各组大鼠造模过程中行为学变化；各组大鼠海马神经细胞病理改变；各组大鼠海马神经NF-κB P65表达的变化。
1.4 统计学处理 采用SPSS17.0 统计软件对NF-κB P65阳性细胞数进行统计学分析。实验数据以均数±标准差(x±s)表示，采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结 果
2.1 各组大鼠行为学观察 A组大鼠腹腔注射生理盐水后，行为活动无异常，无死亡。B组和C组大鼠腹腔注射氯化锂(3 mmol/kg)后，所有大鼠行为活动均无异常，24 h后，腹腔注射匹鲁卡品(30 mg/kg ......
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