1.3主要试剂

    rTaqDNA聚合酶购自Takara公司，限制性内切酶RsaⅠ、HaeⅢ、PstⅠ购自Promega公司，HPV16 L1片段质粒(pBv16)由中国疾病预防控制中心病毒研究所李平川博士惠赠。

    1.4 PCR法检测标本中HPV DNA

    PCR体系包括2.5U TaqDNA 聚合酶，5μL样品DNA，引物MY09/MY11各0.5μmol/L，dNTP各0.2mmol/L和PCR缓冲液。共35个循环，变性94℃ 45s，退火52℃ 1min，延伸72℃ 1min。HPV L1片段质粒作阳性对照,去离子水代替样品作阴性对照。

    1.5限制性片段长度多态性(RFLP)方法分析PCR产物

    限制性内切酶RsaⅠ、 HaeⅢ及Pst Ⅰ对PCR产物进行酶切反应，反应体系包括0.5μL内切酶，0.1%BSA0.2μL，10μLPCR产物。37℃温育1h。终止反应后2%琼脂糖凝胶电泳观察酶切产物。根据酶切电泳图形对HPV分型。

    2结果

    2.1 HPV DNA检测结果

    89例外生殖器皮肤肿瘤标本经PCR扩增 ......