EVER1基因甲基化在尖锐湿疣发病中的作用(1)
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【摘要】 目的：研究EVER1基因在尖锐湿疣发病中的作用。方法：通过对51例尖锐湿疣患者及47例正常对照进行研究，观察EVER1基因甲基化的阳性率。结果：尖锐湿疣组中甲基化阳性率为13.73%(7/51)，部分甲基化率为17.65%(9/51)，非甲基化率为68.62%(35/51)，总甲基化阳性率为31.38%。正常对照组的甲基化阳性率 8.51%(4/47)，部分甲基化率为2.13%(1/47)，非甲基化率为89.36%(42/47)，总甲基化阳性率为10.64%。结论：尖锐湿疣患者甲基化发生率高于正常对照组(P<0.05)，表明尖锐湿疣的发生可能和EVER1基因启动子区的甲基化相关。
【关键词】 EVER1基因； 尖锐湿疣； 甲基化
尖锐湿疣是由人乳头瘤病毒(Human Papillomavirus，HPV)导致的性传播性疾病，HPV的多种型别均可引起尖锐湿疣，临床表现为好发于生殖器部位的疣状损害。疣状表皮发育不良(Epidermodysplasia verruciformis，EV)也是由HPV感染引起的遗传性疾病，易感的HPV为3，5，8型[1]。
DNA的甲基化是由于DNA甲基化转移酶(DNMTs)的作用，导致CpG二核苷酸5’端的胞嘧啶变为5’甲基胞嘧啶。此种DNA修饰方式没有改变基因序列，而是调控了基因的表达[2]。研究表明EVER1和EVER2基因与EV发病密切相关的[3]。而在HPV感染中也有关于对基因甲基化的研究，认为是HPV基因的甲基化导致了尖锐湿疣的发病。我们因此假设是否尖锐湿疣患者的EVER1基因出现了甲基化而导致了其易感性。
1资料与方法
1.1临床资料
本研究中包含51例尖锐湿疣患者和47例正常对照者，均来自于2006～2008年在北京协和医院皮肤科就诊的患者。
1.2方法
试验抽取尖锐湿疣病例组和对照组静脉血各2ml，将其置于抗凝管内，在-20℃冰箱中保存。提取DNA后，进行DNA去甲基化，并行甲基化特异PCR反应。
1.3结果分析
尖锐湿疣组甲基化阳性率 13.73%(7/51)，部分甲基化17.65%(9/51)，非甲基化68.62%(35/51)，总甲基化阳性率为31.38%。
在试验的对照组中其阳性率为8.51%(4/47)，部分甲基化阳性率为2.13%(1/47)，非甲基化89.36%(42/47)，总甲基化阳性率为10.64%。见表1。
1.4统计学分析
采用SPSS13. 0软件分析结果，用卡方检验比较。自由度=1，卡方值=6.25，P<0.05，结果有统计学意义。
2讨论
现在对病毒甲基化的研究很多，对HPV甲基化的研究，HPV-18基因组的DNA甲基化，可以下调转录活性[4]。在无症状的HPV感染中还存在着HPV-16的DNA甲基化[5]。
在人类免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus，HIV)和乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus ，HBV)的感染中也发现了基因甲基化的现象。在初次感染HBV的人中，只有5%～10%会成为慢性HBV携带者[6]。研究发现HBV存在CpG岛并被甲基化[7]，HIV的DNA甲基化也可以影响HIV的复制[8]。
以上说明在病毒感染人体时，病毒DNA的甲基化可能起到了非常重要的作用。
同时甲基化也和自身免疫反应相关。遗传易感性和环境因素在自身免疫性疾病如红斑狼疮、类风湿性关节炎和硬皮病中的作用同样可以见到[9]。有学者研究狼疮的动物模型和人类疾病，发现从狼疮病人中提取的T细胞的DNA是低甲基化的，可以引起甲基化调节基因的过度表达，表观遗传的缺陷特别是DNA甲基化，在狼疮中的发病机制中是很重要的[10]。
图1MS-PCR检测尖锐湿疣中EVER1基因甲基化状态电泳图
1为DNA Marker(100-700bp)；2-3为甲基化引物阳性结果-164bp大小；4-5为非甲基化引物阳性结果-163bp大小；6-7为甲基化和非甲基化引物均为阳性的结果
T细胞的低甲基化可能引起自身抗体的产生，其机制为T细胞DNA的低甲基化引起粘附分子如LFA-1的过度表达，引起自身反应性。这种自身反应性细胞杀伤了巨噬细胞并提供了B细胞的辅助，巨噬细胞被杀伤后所积聚的核小体物质引起了向核小体易感性T细胞的呈递，从而导致了自身抗体反应[11]。同样B淋巴细胞的甲基化在自身免疫系统中也发挥着重要作用[12]，说明DNA甲基化在机体免疫缺陷方面也扮演着重要的角色。
虽然EVER1基因在疣状表皮发育不良病人中的突变时有报道，但有关EVER1基因的甲基化现在还无相关报道。
本试验结果显示尖锐湿疣患者中EVER1基因的甲基化率为31.38% ......
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