14相关指标检测方法

    Patched-1、Gli-1以及Smo的测定方法为Elisa法，同时Western Blot以及RT-PCR进一步确认。

    15Western Blot检测

    取05mL表皮提取液，5000r/min离心提取上清液，BCA定量蛋白，取各样本80μg行聚丙烯酰胺凝胶蛋白电泳，取电泳后目标蛋白半干转法移至PVDF膜，加牛奶封闭2h后取出，加相应一抗洗涤3次，之后加相应二抗洗涤3次，暗室内曝光洗片，扫描仪扫描胶片图像、Image J计算各灰度值，β-actin作内参对照。

    16RT-PCR检测

    取样本总RNA提取试剂盒提取总RNA，定量，定量后每取2μg逆转录cDNA；逆转出cDNA立即行PCR扩增目的片段，扩增次数为35次；扩增出DNA片段后电泳，电泳完成后用凝胶成像仪拍照，Image J软件计算荧光强度值，β-actin作内参对照。

    17统计学处理

    所有数据处理均用SPSS190统计学软件软件 ......