陈尹心，常子豪，胡倩，刘宇琦，高晔，黄雅，雒晓卫，王树楷，周立鹏，王保锦，王朝慧，崔艺彤，刘越，张兰珍(北京中医药大学 中药学院，北京 102488)

    肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)是肿瘤微环境中最丰富的免疫细胞。一般来说，在不同生理病理因素刺激下，巨噬细胞可分化成两种极化状态，即经典活化的M1型和替代活化的M2型。其中，M1型参与促炎反应的同时也发挥抗肿瘤活性，而M2型则参与抗炎反应，并能通过肿瘤免疫抑制等作用促进肿瘤发展。调控M2型巨噬细胞向M1型极化能够增强肿瘤免疫反应、抑制肿瘤生长、转移和肿瘤血管生成[1]。因此，调控肿瘤相关巨噬细胞极化已经成为一种多机制、多功能的高效免疫治疗策略。

    余甘子为大戟科叶下珠属植物余甘子PhyllanthusemblicaL.的干燥成熟果实，具有清热凉血、消食健胃、生津止咳之功效[2]。现代研究表明，余甘子主要含有酚酸类、鞣质类成分。课题组前期研究发现余甘子鞣质在体外能诱导人肝癌细胞BEL-7402早期凋亡和G2/M期阻滞[3]，通过调节MAPK通路，降低MPPs的表达，诱导肿瘤细胞凋亡[4]。临床研究表明余甘子鞣质具有潜在的免疫调节作用[5]。但其是否具有重塑免疫抑制微环境抑制肿瘤生长的作用以及其物质基础和作用机制尚不清楚。因此，本研究以M2型巨噬细胞为对象筛选抑制M2型巨噬细胞极化调节肿瘤微环境的余甘子活性部位，并结合UPLC-Q-Exactive-MS/MS技术和网络药理学分析其物质基础和作用机制。

    1 材料

    1.1 仪器

    超高效液相色谱仪和Q-Exactive 高分辨质谱仪、CO2细胞培养箱、超低温冰箱(Thermo Scientific 公司)；十万分之一分析天平(Sartorius公司)；KQ-500DE超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；超净工作台(北京半导体设备一厂)；DT5-6A 型台式离心机(北京时代北利离心机有限公司)；PCR 扩增仪(德国 Eppendorf 公司)；QuantStudio 6 Flex 实时荧光定量 PCR 仪(CFX 96，Biorad 公司)。

    1.2 试药

    乙腈、甲酸(质谱纯，Thermo Fisher 公司)；蒸馏水[屈臣氏集团(香港)有限公司]；MCI小孔吸附树脂(日本三菱化学公司)；胎牛血清、DMEM培养基(Biological Industries公司)；RNA提取试剂盒、逆转录试剂盒以及 SYBR qPCR Master Mix(南京诺唯赞生物科技股份有限公司)；重组小鼠白细胞介素-4(IL-4)、重组小鼠白细胞介素-13(IL-13)(PeproTech公司)；余甘子鞣质部位(江西青峰药业有限公司) ......