赖晓静，李颜伶，吴珺，徐广，刘湉，王凯赫，母磊鑫，刘清泉，马群*(.北京中医药大学中药学院，北京 0488；.北京中医药大学生命科学学院，北京 0488；3.首都医科大学附属北京中医医院北京市中医研究所，中医感染性疾病基础研究北京市重点实验室，北京 0000)

    铜绿假单胞菌是医院内感染中常见的革兰氏阴性病原菌，耐药机制复杂[1]。其中生物膜(biofilm，BF)是其典型的适应性耐药机制之一，生物膜能帮助铜绿假单胞菌躲避人体免疫系统清除和抗菌药物攻击，对常用抗菌药物产生耐药性[2]；随着生物膜的形成，铜绿假单胞菌的重要毒力因子绿脓菌素的分泌水平将显著提高[3]，导致细菌的致病性和感染性增强[4-5]，病情迁延反复[6]，给临床治疗带来了极大的挑战。

    随着临床单用抗菌药物治疗生物膜感染的效果越来越不尽如人意，联合用药的给药策略获得了广泛的认可[6-8]。多项研究表明抗菌药物联合中药能有效抑制生物膜耐药机制，提高疗效[9-11]。芪归银方(Qiguiyin decoction，QGYD)由黄芪、金银花、当归、青蒿、虎杖5味中药配伍组成，联合广谱抗菌药物使用具有良好的抗感染效果[11-12]，目前关于QGYD干预铜绿假单胞菌生物膜形成的研究还未见报道。本论文基于提取物和含药血清两个层次，研究芪归银方(QGYD)联合左氧氟沙星(LEV)对敏感/耐药铜绿假单胞菌生物膜和绿脓菌素的影响，为中药联合抗菌药物防治生物膜感染的临床用药提供参考。

    1 材料

    1.1 菌株来源

    标准铜绿假单胞菌ATCC27853一代菌株(编号：BNCC337940，北京北纳创联生物技术研究院)；多重耐药铜绿假单胞菌临床分离株(样本号：19PXSP2218，北京中医药大学东直门医院检验科)。

    1.2 试药

    中药饮片黄芪600 g、金银花150 g、当归100 g、青蒿150 g、虎杖100 g(批号分别为90541102、93451002、90280901、93051001、90510501，北京三和药业有限公司)，经北京中医药大学杨瑶君教授鉴定均为正品。左氧氟沙星对照品(批号：Y02N7C23971，HPLC≥99%，上海源叶生物技术有限公司)。左氧氟沙星片[批号：BX00A1，第一三共制药(北京)有限公司]。

    M-H琼脂、M-H肉汤(青岛高科技工业园海博生物技术有限公司，批号分别为20210124、20201202)；0.4%草酸铵结晶紫染液(批号：R20710)、2.5%戊二醛固定液(批号：L26O11G12-8919)、氯化镁、甘油、硫酸钾(分析级 ......