5 Western blot 方法参照文献进行^[8,9]。组织和细胞标本在Laemmli样品缓冲液中进行裂解，使用Bio - Rad公司的蛋白测定仪测定其蛋白浓度。还原条件下，在8%SDS -聚丙烯酰胺凝胶中电泳样品(每泳道80微克蛋白)。电转印将蛋白质转移到硝酸纤维膜(NC)上，用含5%脱脂奶粉的TBST缓冲液37℃下封闭NC膜60min，将兔抗人T-cadherin一抗和β-actin用含5%脱脂奶粉的TBST缓冲液以1：1000和1：200稀释后分别置入含有NC膜的杂交袋中4℃下孵育过夜，TBST缓冲液漂洗数次后，再以1：5000稀释的HRP标记羊抗兔二抗与其孵育，最后用增强化学发光(ECL)进行自显影检测。

    6 siRNA转染 使用两种不同的siRNA：T-cadherin siRNA -1(5'GGACCAGUCAAUUCUAAAC3')和T-cadherin siRNA-2(5'GGAACAAUGACUACUUUUU3')通过RNAi进行T-cadherin沉默。在转录和蛋白水平对T-cad的表达没有作用的第三种T-cadherin siRNA (5'CUCUGUUCGUC CAUGCACG3')作为对照。接近汇合时的MHCC97L(≈8x106细胞)通过简短的胰酶消化进行收获 ......