肝细胞癌中MMP—2/和MMP—9的表达及意义
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【中图分类号】R735.7【文献标识码】A【文章编号】1672-3783(2012)11-0013-01
【摘要】 目的 探讨基质金属蛋白酶-2 (MMP-2)、基质金属蛋白酶-9 (MMP-9) 在肝细胞癌的表达及其与侵袭转移过程中的关系。进一步了解肝细胞癌侵袭转移的发生机理。方法 通过免疫组化EliVision TM Plus法，检测32只大鼠的肝细胞癌模型标本肝癌及癌旁肝组织MMP-2、MMP-9的表达。门静脉癌栓形成作为肝细胞癌侵袭转移标志。结果 免疫组化显示：癌及其癌旁肝组织均有MMP-2、MMP-9表达，MMP-2、MMP-9在肝癌组织的表达显著高于癌旁肝组织(P < 0. 01)；MMP-2、MMP-9在有侵袭转移肝癌组织的表达显著高于无侵袭转移肝癌组织(P < 0. 01 )。MMP-2、MMP-9在无侵袭转移肝癌、癌旁肝组织及有侵袭转移癌旁肝组织的表达无显著差异(P > 0. 05)。结论 肝细胞癌在有侵袭转移情况下MMP-2、MMP-9在癌组织表达明显增高。预示可通过检测癌组织MMP-2、MMP-9表达水平帮助判断肝癌复发、转移风险。因此提示其极有可能成为防治肝细胞癌的生物学标志物。
【关键词】 肝细胞癌 侵袭转移 基质金属蛋白酶类 免疫组化
基质的酶类中基质金属蛋白酶类是主要的直接作用者，而其中的Ⅰ型胶原酶(包括MMP-2 和MMP-9)与肿瘤侵袭转移的关系最为密切。因为，MMP-2、MMP-9 不但可以酶解细胞间基质成份还能酶解基底膜主要成份Ⅰ型胶原。本文采用免疫组化EliVisionTM plus法检测MMP-2和MMP-9，并应用图像分析法进行定量分析32只大鼠的肝细胞癌模型标本二者的变化，并对其进行统计学分析。以探讨MMP-2、MM P-9与肝细胞侵袭、转移之间的关系，探索改善肝细胞癌预后的有效途径。
1对象和方法
1.1实验材料 清洁型雄性Wistar大鼠32只，体重130～150g，为第一军医大学动物实验中心提供。肝组织来源于Wistart大鼠肝癌模型处死后甲醛固定保存的肝组织标本。
1.2主要试剂和仪器 MMP-2 和MMP-9多克隆抗体为福建迈新生物技术有限公司；即用型免疫组化染色试剂盒(EliVisionTM plus法)、DAB 显色剂和poly-lysine粘片剂为福建迈新生物技术有限公司；Olympus，PM-CBAD全自动显微照相机和Camb ridge Quantimet 970型图像分析仪为Japan产品。
1.3组织的采集及定位
1.3.1 肝癌组织 随机取中心癌组织(无液化坏死)0.3cm×0.2cm×0.2cm组织一块，经切片镜下观察，病理证实为肝癌组织。
1.3.2 癌旁组织 肉眼下，尽可能取癌灶以远的非癌肝组织0.3 cm.×0.2.cm.×0.2 cm.一块，镜下观察可见正常肝组织结构。
1.3.3 侵袭转移 通过对每份标本连续切片的镜下观察，以发现门静脉癌栓判定为肝细胞癌的侵袭转移。
1.4免疫组化MMP-2、MMP-9分析 32只大鼠肝组织每只切取肝癌及癌旁肝组织各2张切片，共128张切片，对每只大鼠肝癌及癌旁肝组织2张切片用EliVisionTM plus法分别进行MMP-2、MMP-9免疫组化。MMP-2和MMP-9蛋白的阳性表达产物棕黄色颗粒样物质，主要定位于细胞浆，以细胞膜或胞质出现明显的黄色或棕黄色颗粒视为阳性着色。判定标准[1-2]：每例随机观察5个高倍镜视野，用半定量积分法判定结果：阳性细胞数<5%为0分，6%～25%为1分，26%～50%为2分 ......
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