HPLC法测定降脂灵胶囊中熊果酸的含量
[摘要]目的：建立高效液相色谱法测定降脂灵胶囊中熊果酸的含量方法：色谱柱：YWGC18柱(250mm×4.6mm，5µm)；流动相：甲醇-0.4%磷酸(86：14)；流速：1.0ml/min；检测波长：205nm结果：熊果酸在0.470~3.760µg之间线性关系良好，相关系数r=0.99997。回收率为99.15%，RSD=0.72%结论：本方法简便，准确，重复性好，可用于降脂灵胶囊的质量控制
[关键词]降脂灵胶囊；熊果酸；高效液相色谱法
降脂灵胶囊是由山楂、泽泻、丹参等七味中药组成的制剂，具有利湿祛痰，活血逐瘀之功效，用于痰瘀互结型高脂血症，本文对其君药山楂中的熊果酸进行含量测定，作为检测和控制该制剂的含量指标，以利于该产品质量的
有效控制。
1仪器与试药
, http://www.100md.com
美国HP1100高效液相色谱仪(HP G1322A真空脱气泵、HP G1311A四元泵、HP G1313A ALS自动进样器，HP G1315 DAD二极管阵列检测器、HP Chemstation system化学工作站) SB3200超声波处理器(上海必能信仪器厂)；电子天平(德国赛多利斯BP211D)；熊果酸对照品(中国药品生物制品检定所)
甲醇为色谱醇(天津化工二厂)；水为双蒸水；其他化学试剂均为分析纯
2方法与结果
2.1色谱条件
色谱柱YWG C18柱(250mm×4.6mm，5µm)； 流动相：甲醇-0.4%磷酸(86：14)； 流速：1.0ml/min； 检测波长为205nm； 理论塔板数按熊果酸峰计算应不低于3000
, 百拇医药 2.2对照品溶液的制备
精密称取在60℃减压干燥4h的熊果酸对照品适量，加流动相制成每1ml含150µg的溶液，即得。
2.3供试品溶液的制备
取本品内容物4g，精密称定，置索氏提取器中，加乙醚适量，回流提取至提取液基本无色，回收乙醚至干，残渣用石油醚(30~60℃)浸泡2次，每次15ml(约2min)，倾去石油醚液，残渣加甲醇使溶解，转移至10ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，滤过，取滤液，即得。
2.4线性关系考察
精密吸取熊果酸对照品适量，用甲醇溶解制成浓度为0.188mg/ml的溶液，作为对照品溶液，分别精密吸取对照品溶液2.5µl，5µl，10µl，15µl，20µl依次测定，以熊果酸量(µg)为横坐标，峰面积(A)为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y=4003.65565X+1.53423，相关系数r=0.99997，结果表明熊果酸在0.470~3.760µg范围内线性关系良好。
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2.5精密度试验
精密吸取上述浓度为0.188mg/ml的对照品溶液10µl重复进样5次，RSD=1.17%，表明精密度良好。
2.6稳定性试验
精密吸取同一份供试品溶液在0、3、5、7、9h分别进样10µl，记录峰面积积分值，平均为847.215，RSD=1.48%，结果表明，试验方法稳定，供试品液至少在9h内测定较稳定。
2.7重复性试验
取同一批号的样品5份各约4g，精密称定，分别按供试品溶液制备方法进行提取，分别进样10µl，含量测定。测定几份样品熊果酸平均值为0.362mg/g， RSD=2.39%表明方法重复性良好。
2.8回收率试验
, 百拇医药
分别取已知含量(0.362mg/g)的样品5份各2g，精密称定，分别精密添加一定量的对照品，按供试品溶液制备方法进行提取，含量测定，计算熊果酸回收率，平均回收率为99.15%，RSD=0.72%。
2.9样品测定
取三批样品，每批2份各4g，精密称定，按上述制备方法制备供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液和与供试品溶液各10µl按上述色谱条件测定，以外标法计算样品中熊果酸的含量，本品每粒中熊果酸含量应不低于0.15mg
2.10空白试验
取山楂阴性样品4g精密称定，照含测项下方法制备阴性样品溶液。精密吸取阴性样品溶液，样品溶液，对照品溶液及空白溶剂各10µl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，结果熊果酸相应的保留时间阴性无干扰。
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3.1测定方法的确定
据目前文献报道熊果酸含量测定方法有比色法，薄层扫描及高效液相等，但由于薄层扫描法受诸多不易控制因素影响，如薄层板的均匀性，层析时的蒸汽饱和度，温度，点样量的误差，显色时温度差异，相对湿度等直接导致定量分析结果重现性，精密度。稳定性欠佳，故采用HPLC法进行含测，该法准确，灵敏度高，重现性好，简便可行，更适用于该制剂的质量控制。
3.2含测指标的选择
君药山楂主要含有有机酸及黄酮类化合物两大类成分，其中金丝桃苷，熊果酸分别为黄酮类，有机酸类成分的主要成分，通过临床实验研究，二者均具有降低胆固醇和调节血脂作用，为全面监控本品中山楂的质量，实验对山楂中黄酮类成分金丝桃苷及有机酸成分熊果酸采用HPLC法进行含量测定研究，结果测定金丝桃苷时山楂阴性样品在与金丝桃苷相应位置有干扰，而熊果酸含量测定阴性无干扰，并通过方法学考察，本法线性关系良好，精密度，重现性。稳定性，回收率均较好，故采用熊果酸作为本制剂的含测指标。
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3.3供试品溶液的制备
本实验对供试品制备采用过多种方法，主要有以下几种：(1)先用石油醚(30～60℃)适量索氏提取1h，弃去提取液再用乙醚索氏提取至提取液近无色，倾出乙醚液蒸干，用甲醇定容至10ml量瓶中(2)先用乙醚适量索氏提取至提取液无色，挥干乙醚后用石油醚(30～60℃)浸泡2次，每次15ml(约2min)弃去石油醚液，残渣加甲醇定容至10ml量瓶中(3)样品用水溶解转移至分液漏斗中，先用石油醚(30～60℃)萃取2次，每次15ml，弃去石油醚层再用乙醚萃取4次(20、20、20、15)合并乙醚萃取液蒸干，用甲醇定容至10ml量瓶中，通过对三种方法的比较，以法(2)提取效率最高，故采用此种供试品溶液的制备方法。
参考文献：
[1]施慧君，黄有光.HPLC法测定知柏地黄冲剂中熊果酸含量.中药材[J]. 2004，27(2)：136～137.
[2]谭永红，姜云平，曾仁杰等，高效液相色谱法测定胃炎停胶囊中齐墩果酸，熊果酸的含量. 中国医院药学杂志[J]. 2004，24(2)：71～72.
[3]李标，张揩，曹文丁等，高效液相色谱法测定山楂叶中金丝桃苷的含量. 中国药业[J]. 2003，12(12)：37～38., http://www.100md.com(杨 蕾)
[关键词]降脂灵胶囊；熊果酸；高效液相色谱法
降脂灵胶囊是由山楂、泽泻、丹参等七味中药组成的制剂，具有利湿祛痰，活血逐瘀之功效，用于痰瘀互结型高脂血症，本文对其君药山楂中的熊果酸进行含量测定，作为检测和控制该制剂的含量指标，以利于该产品质量的
有效控制。
1仪器与试药
, http://www.100md.com
美国HP1100高效液相色谱仪(HP G1322A真空脱气泵、HP G1311A四元泵、HP G1313A ALS自动进样器，HP G1315 DAD二极管阵列检测器、HP Chemstation system化学工作站) SB3200超声波处理器(上海必能信仪器厂)；电子天平(德国赛多利斯BP211D)；熊果酸对照品(中国药品生物制品检定所)
甲醇为色谱醇(天津化工二厂)；水为双蒸水；其他化学试剂均为分析纯
2方法与结果
2.1色谱条件
色谱柱YWG C18柱(250mm×4.6mm，5µm)； 流动相：甲醇-0.4%磷酸(86：14)； 流速：1.0ml/min； 检测波长为205nm； 理论塔板数按熊果酸峰计算应不低于3000
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精密称取在60℃减压干燥4h的熊果酸对照品适量，加流动相制成每1ml含150µg的溶液，即得。
2.3供试品溶液的制备
取本品内容物4g，精密称定，置索氏提取器中，加乙醚适量，回流提取至提取液基本无色，回收乙醚至干，残渣用石油醚(30~60℃)浸泡2次，每次15ml(约2min)，倾去石油醚液，残渣加甲醇使溶解，转移至10ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，滤过，取滤液，即得。
2.4线性关系考察
精密吸取熊果酸对照品适量，用甲醇溶解制成浓度为0.188mg/ml的溶液，作为对照品溶液，分别精密吸取对照品溶液2.5µl，5µl，10µl，15µl，20µl依次测定，以熊果酸量(µg)为横坐标，峰面积(A)为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y=4003.65565X+1.53423，相关系数r=0.99997，结果表明熊果酸在0.470~3.760µg范围内线性关系良好。
, http://www.100md.com
2.5精密度试验
精密吸取上述浓度为0.188mg/ml的对照品溶液10µl重复进样5次，RSD=1.17%，表明精密度良好。
2.6稳定性试验
精密吸取同一份供试品溶液在0、3、5、7、9h分别进样10µl，记录峰面积积分值，平均为847.215，RSD=1.48%，结果表明，试验方法稳定，供试品液至少在9h内测定较稳定。
2.7重复性试验
取同一批号的样品5份各约4g，精密称定，分别按供试品溶液制备方法进行提取，分别进样10µl，含量测定。测定几份样品熊果酸平均值为0.362mg/g， RSD=2.39%表明方法重复性良好。
2.8回收率试验
, 百拇医药
分别取已知含量(0.362mg/g)的样品5份各2g，精密称定，分别精密添加一定量的对照品，按供试品溶液制备方法进行提取，含量测定，计算熊果酸回收率，平均回收率为99.15%，RSD=0.72%。
2.9样品测定
取三批样品，每批2份各4g，精密称定，按上述制备方法制备供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液和与供试品溶液各10µl按上述色谱条件测定，以外标法计算样品中熊果酸的含量，本品每粒中熊果酸含量应不低于0.15mg
2.10空白试验
取山楂阴性样品4g精密称定，照含测项下方法制备阴性样品溶液。精密吸取阴性样品溶液，样品溶液，对照品溶液及空白溶剂各10µl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，结果熊果酸相应的保留时间阴性无干扰。
, http://www.100md.com
3.1测定方法的确定
据目前文献报道熊果酸含量测定方法有比色法，薄层扫描及高效液相等，但由于薄层扫描法受诸多不易控制因素影响，如薄层板的均匀性，层析时的蒸汽饱和度，温度，点样量的误差，显色时温度差异，相对湿度等直接导致定量分析结果重现性，精密度。稳定性欠佳，故采用HPLC法进行含测，该法准确，灵敏度高，重现性好，简便可行，更适用于该制剂的质量控制。
3.2含测指标的选择
君药山楂主要含有有机酸及黄酮类化合物两大类成分，其中金丝桃苷，熊果酸分别为黄酮类，有机酸类成分的主要成分，通过临床实验研究，二者均具有降低胆固醇和调节血脂作用，为全面监控本品中山楂的质量，实验对山楂中黄酮类成分金丝桃苷及有机酸成分熊果酸采用HPLC法进行含量测定研究，结果测定金丝桃苷时山楂阴性样品在与金丝桃苷相应位置有干扰，而熊果酸含量测定阴性无干扰，并通过方法学考察，本法线性关系良好，精密度，重现性。稳定性，回收率均较好，故采用熊果酸作为本制剂的含测指标。
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3.3供试品溶液的制备
本实验对供试品制备采用过多种方法，主要有以下几种：(1)先用石油醚(30～60℃)适量索氏提取1h，弃去提取液再用乙醚索氏提取至提取液近无色，倾出乙醚液蒸干，用甲醇定容至10ml量瓶中(2)先用乙醚适量索氏提取至提取液无色，挥干乙醚后用石油醚(30～60℃)浸泡2次，每次15ml(约2min)弃去石油醚液，残渣加甲醇定容至10ml量瓶中(3)样品用水溶解转移至分液漏斗中，先用石油醚(30～60℃)萃取2次，每次15ml，弃去石油醚层再用乙醚萃取4次(20、20、20、15)合并乙醚萃取液蒸干，用甲醇定容至10ml量瓶中，通过对三种方法的比较，以法(2)提取效率最高，故采用此种供试品溶液的制备方法。
参考文献：
[1]施慧君，黄有光.HPLC法测定知柏地黄冲剂中熊果酸含量.中药材[J]. 2004，27(2)：136～137.
[2]谭永红，姜云平，曾仁杰等，高效液相色谱法测定胃炎停胶囊中齐墩果酸，熊果酸的含量. 中国医院药学杂志[J]. 2004，24(2)：71～72.
[3]李标，张揩，曹文丁等，高效液相色谱法测定山楂叶中金丝桃苷的含量. 中国药业[J]. 2003，12(12)：37～38., http://www.100md.com(杨 蕾)