血管内皮生长因子、血管生成素-2表达及微血管密度与肺癌预后的关系
(延安大学附属医院胸心外科 陕西延安 716000)
[摘 要]目的研究肺癌中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、血管生成素-2(angiopoietin-2, Ang-2)表达水平与微血管密度(Microvascular density,MVD)的相关性，探讨三者对肺癌生存率的影响及与生存期的相关性，为判断肺癌预后提供依据。
方法免疫组化法检测96例肺癌手术切除标本中VEGF、MVD表达，western-blotting检测肺癌标本中Ang-2表达变化。
结果肺癌标本中VEGF、Ang-2高表达，MVD高表达组患者5年累积生存率分别为17.2%、16.3%、15.5%，显著低于低表达组(37.5%、31.9%、36.8% )(P<0.01)；VEGF、Ang-2基因表达，MVD与术后生存期负相关(P<0.05)；VEGF、Ang-2基因表达水平与MVD正相关(P<0.05)。
结论VEGF、Ang-2表达水平越高，MVD越大，肺癌患者生存率越低，生存期越短，是判断肺癌预后有价值的指标。抑制VEGF、Ang-2的表达来降低MVD可能成为治疗肺癌的新靶点。
[关键词]肺癌；血管内皮生长因子；血管生成素-2；微血管密度
[中图分类号] R734.2
[文献标识码] A[文章编号] 1672-4208(2008)21-0004-03
Effects of the Expressions of VEGF and Ang-2 and MVD on the Prognosis of Lung Cancer YANG Yang. Department of Cardiothoracic Surgery, Affiliated Hospital of Yan’an University, Yan’an 716000, China
【Abstract】 Objective To explore the relationship between VEGF, Ang-2 gene expressionand MVD, and their effects on the prognosis of lung cancer.
Methods The expression of VEGF and MVD of 96lung cancer tissues were detected by immunohistochemical staining (LSAB Methods), and of Ang-2 of 96lung cancer tissues were detected bywestern-blotting.
Results The 5-year cumulativesurvival rates of groups with high expression of VEGF and Ang-2 and high MVD were 17.2%, 16.3% and 15.5%, which were significantly lower than that of groups with low VEGF, Ang-2 expression and low MVD(37.5%, 31.9% and 36.8% respectively)(P<0.01). The survival rate of lung cancer patients was negatively related to the expression of VEGF, Ang-2 and MVD (P<0.05). The expression of VEGF and Ang-2 in lung cancer tissue was positively related to MVD.
Conclusion The higher expression of VEGF and Ang-2 and higher MVD thetissue presented, the lower survival rateand lower survival duration occurred, so the expression of VEGF and Ang-2 and MVD of tissue can be used to determine the prognosis of lung cancer, and inhibition of the expression of VEGF and Ang-2 and MVD maybe a way of curing lung cancer.
【Key words】 Lung cancer; VEGF; Ang-2; MVD
肺癌是世界上发病率和死亡率均较高的恶性肿瘤之一，其生长和转移是多因素共同作用的结果，其中血管生成是肺癌侵袭和转移的解剖学和生理学基础，也是影响预后的主要原因，抑制肺癌血管生成也是临床防治肺癌的重要手段之一。本实验研究了血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、血管生成素-2(angiopoietin-2, Ang-2)基因表达水平及微血管密度(microvascular density,MVD)在判断肺癌预后中的意义，旨在为临床针对VEGF、Ang-2基因表达进行治疗，提高患者肺癌生存率提供依据。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 组织标本 96例肺癌手术切除标本均来自延安大学附属医院胸心外科1999年1月至2002年5月接受手术治疗的患者，其中男性68例，女性28例；平均年龄(53.16±9.23)岁。腺癌47例，鳞癌38例，腺鳞癌11例。肿瘤直径(4.0±0.3)cm。低分化癌36例，中分化癌39例，高分化癌21例。I+Ⅱ期46例，Ⅲ+Ⅳ 期50例(国际pTNM 分期，UICC1997分期标准)。
1.1.2 主要试剂 兔抗人VEGF多克隆抗体，兔抗人Ang-2多克隆抗体(Santa Cruz)，兔抗人F-VIII蛋白多克隆抗体，生物素化标记的羊抗兔抗体，SP复合物(武汉博士德生物工程有限公司)。
1.2 方法
1.2.1 免疫组化检测VEGF表达及MVD 石蜡切片(5 μm厚)常规脱蜡，逐级水化，先经3%H2O2室温下灭活内源性过氧化物酶活性20 min，0.01 mol/L枸缘酸缓冲液行抗原修复，然后依次加入正常小牛血清(1:l0)，VEGF、Ang-1、F-Ⅷ抗体(1:100)，生物素标记的兔抗鼠抗体，生物素标记羊抗兔抗体(1:200)，SP复合物(1:200)。各步之间均经37℃恒温箱孵育30 min，PBS冲洗(小牛血清除外)，最后DAB染色，苏木素复染，树脂封片。用PBS代替一抗体作为空白对照。肿瘤细胞浆或细胞膜显示棕黄色颗粒者为阳性。每张切片于400倍镜下观察3个视野，每个视野观察100个细胞，计算出每张切片上VEGF的阳性表达百分数。表达阳性率≥80%者列为VEGF基因高表达组，表达阳性率<80%者列为VEGF基因低表达组。微血管定位于癌灶内或间质内，以Weidner计数标准计算肿瘤组织内着色的毛细血管和微血管，凡是由内皮细胞形成的条状、裂隙状等孤立或簇状结构及有管腔者，均记为1条。而血管腔直径大于8个红细胞或管腔可见平滑肌者不记入内。用400倍视野下计数3个视野，取其平均值作为MVD。血管阳性率≥30%者为高MVD组，表达阳性率为<30%者为低MVD组。, http://www.100md.com(杨 扬)
[摘 要]目的研究肺癌中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、血管生成素-2(angiopoietin-2, Ang-2)表达水平与微血管密度(Microvascular density,MVD)的相关性，探讨三者对肺癌生存率的影响及与生存期的相关性，为判断肺癌预后提供依据。
方法免疫组化法检测96例肺癌手术切除标本中VEGF、MVD表达，western-blotting检测肺癌标本中Ang-2表达变化。
结果肺癌标本中VEGF、Ang-2高表达，MVD高表达组患者5年累积生存率分别为17.2%、16.3%、15.5%，显著低于低表达组(37.5%、31.9%、36.8% )(P<0.01)；VEGF、Ang-2基因表达，MVD与术后生存期负相关(P<0.05)；VEGF、Ang-2基因表达水平与MVD正相关(P<0.05)。
结论VEGF、Ang-2表达水平越高，MVD越大，肺癌患者生存率越低，生存期越短，是判断肺癌预后有价值的指标。抑制VEGF、Ang-2的表达来降低MVD可能成为治疗肺癌的新靶点。
[关键词]肺癌；血管内皮生长因子；血管生成素-2；微血管密度
[中图分类号] R734.2
[文献标识码] A[文章编号] 1672-4208(2008)21-0004-03
Effects of the Expressions of VEGF and Ang-2 and MVD on the Prognosis of Lung Cancer YANG Yang. Department of Cardiothoracic Surgery, Affiliated Hospital of Yan’an University, Yan’an 716000, China
【Abstract】 Objective To explore the relationship between VEGF, Ang-2 gene expressionand MVD, and their effects on the prognosis of lung cancer.
Methods The expression of VEGF and MVD of 96lung cancer tissues were detected by immunohistochemical staining (LSAB Methods), and of Ang-2 of 96lung cancer tissues were detected bywestern-blotting.
Results The 5-year cumulativesurvival rates of groups with high expression of VEGF and Ang-2 and high MVD were 17.2%, 16.3% and 15.5%, which were significantly lower than that of groups with low VEGF, Ang-2 expression and low MVD(37.5%, 31.9% and 36.8% respectively)(P<0.01). The survival rate of lung cancer patients was negatively related to the expression of VEGF, Ang-2 and MVD (P<0.05). The expression of VEGF and Ang-2 in lung cancer tissue was positively related to MVD.
Conclusion The higher expression of VEGF and Ang-2 and higher MVD thetissue presented, the lower survival rateand lower survival duration occurred, so the expression of VEGF and Ang-2 and MVD of tissue can be used to determine the prognosis of lung cancer, and inhibition of the expression of VEGF and Ang-2 and MVD maybe a way of curing lung cancer.
【Key words】 Lung cancer; VEGF; Ang-2; MVD
肺癌是世界上发病率和死亡率均较高的恶性肿瘤之一，其生长和转移是多因素共同作用的结果，其中血管生成是肺癌侵袭和转移的解剖学和生理学基础，也是影响预后的主要原因，抑制肺癌血管生成也是临床防治肺癌的重要手段之一。本实验研究了血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、血管生成素-2(angiopoietin-2, Ang-2)基因表达水平及微血管密度(microvascular density,MVD)在判断肺癌预后中的意义，旨在为临床针对VEGF、Ang-2基因表达进行治疗，提高患者肺癌生存率提供依据。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 组织标本 96例肺癌手术切除标本均来自延安大学附属医院胸心外科1999年1月至2002年5月接受手术治疗的患者，其中男性68例，女性28例；平均年龄(53.16±9.23)岁。腺癌47例，鳞癌38例，腺鳞癌11例。肿瘤直径(4.0±0.3)cm。低分化癌36例，中分化癌39例，高分化癌21例。I+Ⅱ期46例，Ⅲ+Ⅳ 期50例(国际pTNM 分期，UICC1997分期标准)。
1.1.2 主要试剂 兔抗人VEGF多克隆抗体，兔抗人Ang-2多克隆抗体(Santa Cruz)，兔抗人F-VIII蛋白多克隆抗体，生物素化标记的羊抗兔抗体，SP复合物(武汉博士德生物工程有限公司)。
1.2 方法
1.2.1 免疫组化检测VEGF表达及MVD 石蜡切片(5 μm厚)常规脱蜡，逐级水化，先经3%H2O2室温下灭活内源性过氧化物酶活性20 min，0.01 mol/L枸缘酸缓冲液行抗原修复，然后依次加入正常小牛血清(1:l0)，VEGF、Ang-1、F-Ⅷ抗体(1:100)，生物素标记的兔抗鼠抗体，生物素标记羊抗兔抗体(1:200)，SP复合物(1:200)。各步之间均经37℃恒温箱孵育30 min，PBS冲洗(小牛血清除外)，最后DAB染色，苏木素复染，树脂封片。用PBS代替一抗体作为空白对照。肿瘤细胞浆或细胞膜显示棕黄色颗粒者为阳性。每张切片于400倍镜下观察3个视野，每个视野观察100个细胞，计算出每张切片上VEGF的阳性表达百分数。表达阳性率≥80%者列为VEGF基因高表达组，表达阳性率<80%者列为VEGF基因低表达组。微血管定位于癌灶内或间质内，以Weidner计数标准计算肿瘤组织内着色的毛细血管和微血管，凡是由内皮细胞形成的条状、裂隙状等孤立或簇状结构及有管腔者，均记为1条。而血管腔直径大于8个红细胞或管腔可见平滑肌者不记入内。用400倍视野下计数3个视野，取其平均值作为MVD。血管阳性率≥30%者为高MVD组，表达阳性率为<30%者为低MVD组。, http://www.100md.com(杨 扬)