1.2.3蛋白免疫印迹将颈动脉保存在液氮中并储存在-80 ℃冰箱中。样品被均质化，蛋白质通过RIPA裂解缓冲液提取，蛋白质浓度通过BCA法定量。将等量蛋白质(20 μg)上样，并通过150 g/L十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE电泳)。然后，将蛋白转移并固定到聚偏二氟乙烯膜上(PVDF膜，Millipore，美国)。使用体积分数0.05的脱脂牛奶将膜在室温下封闭2 h，然后在4 ℃下用一抗(1∶1 000)孵育过夜。次日，将膜与相应辣根过氧化物酶(HRP)标记的二抗(1∶5 000)(北京康为世纪生物科技有限公司)在室温下孵育1 h。采用GE Image Quant LAS 4000mini超灵敏化学发光成像仪显影，并用Image Pro Plus软件对吸光度进行测定。以管家蛋白GAPDH(上海碧云天生物科技有限公司)作为内参蛋白。

    1.3统计学方法

    应用SPSS 21.0统计软件进行处理。计量数据用[AKx-D]±s形式表示，多组之间的比较用单因素方差分析法(ANOVA)进行分析，多重比较采用LSD、SNK、Tukey等方法 ......