1.5Western blot方法检测线粒体分裂相关蛋白Drp1、Fis1和凋亡相关蛋白细胞色素C(CytC)、凋亡诱导因子(AIF)的表达

    提取各组海马神经元细胞蛋白，用BCA法检测提取的蛋白浓度。配制相应的分离胶和浓缩胶，对提取的蛋白质分别电泳、转膜2 h，再用50 g/L脱脂奶粉封闭2 h，分别加入兔抗鼠单克隆一抗Drp1(美国Milipore公司，1∶400)、小鼠抗大鼠单克隆一抗CytC(美国Milipore公司，1∶1 000)、兔抗鼠单克隆一抗AIF(美国Milipore公司，1∶1 000)以及小鼠抗大鼠单克隆一抗Fis1(美国Milipore公司，1∶

    1 000)，4 ℃孵育过夜。大约12 h之后，用PBS洗膜3次，每次约10 min。然后加入相应的辣根过氧化物酶标记的山羊抗小鼠、山羊抗兔IgG二抗(美国Milipore公司，1∶5 000)孵育2 h，PBS冲洗4次，每次约5 min。化学发光法显色，X线底片曝光，使用Image Pro软件分析结果。以GAPDH为内参，以目的蛋白与GAPDH灰度值的比值表示目的蛋白的表达水平 ......