1.4.5 Western blot檢测HPK1的表达 大鼠缺血2 h再灌注24 h后，每组取5只，以水合氯醛麻醉，经心脏灌注肝素化生理盐水，取缺血侧半球脑组织100 mg，加入细胞裂解液，冰上超声波震荡提取蛋白，用冷冻离心机(Eppendorf 5801，德国)在4 ℃下以12 000 r/min离心10 min，去沉淀取上清液，用BCA法测蛋白浓度。蛋白经100 g/L的SDS-PAGE凝胶电泳，湿法转至PVDF膜上。以50 g/L的BSA室温封闭2 h，加入HPK1一抗(1∶1 000)4 ℃孵育过夜，加二抗(1∶5 000)室温孵育2 h，发光显影。应用凝胶成像分析系统(Biospectrum 810 Imaging system，UVP，USA)测定各条带的灰度值，计算目的蛋白的相对灰度值(RVP)，RVP=目的蛋白灰度值/β-actin内参灰度值。

    1.5 统计学处理

    应用SPSS 20.0软件进行统计学分析 ......