1.4.5 Western blot檢测HPK1的表达 大鼠缺血2 h再灌注24 h后，每组取5只，以水合氯醛麻醉，经心脏灌注肝素化生理盐水，取缺血侧半球脑组织100 mg，加入细胞裂解液，冰上超声波震荡提取蛋白，用冷冻离心机(Eppendorf 5801，德国)在4 ℃下以12 000 r/min离心10 min，去沉淀取上清液，用BCA法测蛋白浓度。蛋白经100 g/L的SDS-PAGE凝胶电泳，湿法转至PVDF膜上。以50 g/L的BSA室温封闭2 h，加入HPK1一抗(1∶1 000)4 ℃孵育过夜，加二抗(1∶5 000)室温孵育2 h，发光显影。应用凝胶成像分析系统(Biospectrum 810 Imaging system，UVP，USA)测定各条带的灰度值，计算目的蛋白的相对灰度值(RVP)，RVP=目的蛋白灰度值/β-actin内参灰度值。

    1.5 统计学处理

    应用SPSS 20.0软件进行统计学分析 ...... 濠碘€冲€归悘澶愬箖閵娿儲韬ù锝堟硶閺併倝骞嶇€ｎ偅绨氱紒娑橆槹缁侊妇鎲撮崼鐔割槯闁哄啰濮电涵鍫曞蓟閵壯勭畽闁瑰瓨鐗旂粭鍛姜閽樺寮块柡鍌氭祫缁辨繈宕ｉ婵嗗幋闁哄嫷鍨甸～锕傚箹濠婂懎鍋嶇€殿喗娲橀幖鍛婂緞鏉堚晜鍩傞柍銉︾矎濞村棝鎯嶆担娴嬪亾濠垫挾绀夐悹鍥棑閸嬶綁宕欑拠鑼綄妤犵偞娲樺〒鑸电▔鐎ｎ偅鐓欓柣銊ュ閳ь剚绮庨弫鎼佹嚇閹寸姴顣奸柍銉︾箖閸ㄣ劑鍨惧⿰鍐ㄦ枾缂傚啯鍨块妴澶愬灳濠靛⿴鍟忛梻鍌ゅ枔閳ь剨鎷�


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