1.2.4 活性氧(ROS)的测定 应用ROS检测试剂盒DCFH-DA法测定ROS水平。赤霉素处理后，PBS洗涤3次并离心(1 500 r/min，3 min)，悬浮于稀释好的DCFH-DA中，细胞密度为(0.1～2.0)×1010/L，37 ℃避光反应30 min，用流式细胞仪测定波长530 nm处的ROS含量。实验至少重复3次。

    1.2.5 免疫荧光技术检测氧化应激、凋亡相关蛋白表达量 赤霉素处理后的精液样品用PBS洗涤3次并离心(1 500 r/min，3 min)，弃上清，用40 g/L的多聚甲醛固定至少1 h，然后将固定好的精子细胞均匀涂抹于载玻片上，自然晾干；PBS浸洗玻片3次，每次5 min；20 g/L的Triton X-100(PBS配制)室温通透30 min，PBS浸洗玻片3次，每次5 min，吸水纸吸干PBS，在玻片上滴加100 g/L的BSA，室温封闭30 min；吸水纸吸掉封闭液，每张玻片滴加足够量的一抗(1∶100)并放入湿盒，37 ℃避光孵育2 h；用10 g/L的 BSA洗涤3次 ......