1.2研究方法

    1.2.1样本采集于分娩前采集孕母外周血约2 mL，置于乙二胺四乙酸抗凝管中混匀，-80 ℃冰箱冻存，以备DNA的提取。

    1.2.2DNA提取从-80 ℃冰箱中取出收集的样本，取400 μL孕妇外周血，使用血液基因组DNA提取试剂盒(TIANamp，Beijing，China)，根据试剂盒操作手册进行DNA的提取，然后置-20 ℃冰箱保存。

    1.2.3重亚硫酸盐转化MSP的模板是经重亚硫酸盐处理的DNA。利用DNA重亚硫酸盐转化试剂盒(TIANamp，Beijing，China)对上述提取的DNA进行转化修饰，使未甲基化的胞嘧啶转变为尿嘧啶，而甲基化的不变。然后对转化后的产物进行纯化。

    1.2.4MSP由Invitrogen生物公司设计合成两对引物：一对结合处理后的甲基化DNA，另一对结合处理后的未甲基化DNA。引物序列见表2。按照MSP试剂盒(TIANamp，Beijing，China)配制20 μL反应体系：DNA模板500 ng，上下游引物各1 μL，Taq酶0.4 μL ......