shRNA`-Slit2对骨肉瘤MG63细胞迁移、增殖和凋亡影响(3)
1.5Transwell小室实验检测细胞的迁移将3组细胞经胰蛋白酶消化后收集,按照试剂盒说明书方法,将基底膜的基质原液放在冷藏冰箱(4 ℃)过夜融化,然后与预冷的无血清的RPMI`-1640按照1∶3的比例配制侵袭上室凝胶液体,以每孔55 μL的量包被Transwell小室的上室,放置在37 ℃的孵育箱,2 h后使上室成胶。然后,在上室每孔接种200 μL不含血清的细胞培养液,下室加入含体积分数0.10胎牛血清的RPMI`-1640培养液500 μL。将Transwell板放置在37 ℃的孵育箱中培养24 h后用结晶紫染色,进行细胞计数。所有实验均重复3次。
1.6CCK`-8实验检测细胞的增殖
收集3组经胰蛋白酶消化后细胞,按照CCK`-8试剂盒说明书方法,以每孔50个的量接种在96孔板中,72 h后每孔加入10 μL的CCK`-8试剂,放到37 ℃孵育箱中培养2 h。然后,应用酶标仪分别检测450 nm波长处吸光度值,每组设置3个复孔。所有实验均重复3次。
1.7细胞凋亡检测
收集3组经胰蛋白酶消化后细胞,按照AV`-PI试剂盒说明书操作,检测3组细胞的凋亡率。流式细胞仪分析各组样本,计算3组细胞的凋亡率。Annexin V+/PI-为早期凋亡细胞 ......
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