miR`-375对结直肠癌细胞侵袭迁移影响及其与Notch2通路蛋白的关系(3)
1.2.6Western Blot方法检测Notch2蛋白相对表达量提取细胞蛋白,使用BCA法检测蛋白浓度,用Western Blot方法分别检测实验组、NC组、空白组细胞以及Notch2`-siRNA组、Notch2阴性对照组、空白组细胞的Notch2蛋白表达。将50 μg蛋白在SDS`-PAGE凝胶上电泳并分离,将分离后的蛋白分子转至PVDF膜上,于低速摇床上用含脱脂奶粉的TBST溶液室温封闭2 h。加入Notch2一抗(1∶1 000),4 ℃过夜孵育。加入二抗(1∶3 000)孵育2 h。用ECL发光液在显影仪中进行目的蛋白显影并保存图片。分析条带灰度,以目的条带灰度值/内参条带灰度值表示Notch2蛋白相对表达量。实验重复3次。1.3统计学分析
应用SPSS 19.0软件对实验数据进行统计学分析。计量资料结果以±s形式表示,多组数据间比较采用方差分析,两组数据间比较应用t检验。以P<0.05表示差异有统计学意义。
2结果
2.1miR`-375对各指标检测结果的影响
2.1.1HCT`-116细胞、FHC细胞miR`-375表达比较HCT116细胞、FHC细胞miR`-375相对表达量比较差异有显著性(t=33.02 ......
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