青岛地区HBV DNA阳性献血者的血清学和分子生物学特征(1)
[摘要]目的调查青岛地区HBV DNA阳性献血者病毒载量和血清学特征，并分析其HBV基因型。方法无偿献血样本HBsAg-/HBV-DNA+32例，HBsAg+/HBV-DNA+7例，行高精度病毒载量检测和补充血清学试验，并通过S区扩增测序结合多对型特异性引物巢式PCR法分析HBV基因型。结果32例HBsAg-/HBV-DNA+样本中，HBcAb+30例(93.75%)，HBV DNA定量阴性17例，定量阳性15例;测序分型确定基因型4例为B型，其中1例發现两处突变，分别为126位苏氨酸/异亮氨酸(T/I)突变为丙氨酸(A)、175位亮氨酸(L)突变为丝氨酸(S)。7例HBsAg+/HBV-DNA+样本HBV DNA均定量阳性，确定基因型2例为B型，3例为C型。结论大部分HBsAg-/HBV-DNA+献血者的HBcAb为阳性，HBV DNA呈低浓度，感染的HBV主要基因型为B型和C型。
[关键词]供血者;乙型肝炎病毒;血清学试验;遗传学
[中图分类号]R446.6[文献标志码]A[文章编号]2096-5532(2019)03-0338-05
[ABSTRACT]ObjectiveTo investigate the viral load， serological characteristics， and hepatitis B virus (HBV) genotype of HBV DNA-positive donors in Qingdao， China. MethodsA total of 32 HBsAg-/HBV-DNA+ blood samples and 7 HBsAg+/HBV-DNA+ samples were selected. High-precision viral load measurement and supplementary serological test were performed， and S-region sequencing combined with specific-primer nested PCR was used to analyze HBV genotype. ResultsAmong the 32 HBsAg-/HBV-DNA+ samples， 30 (93.75%) were HBcAb+; 15 had negative HBV DNA， and 17 had positive HBV DNA; sequencing and genotyping showed that 4 samples had genotype B， among which 1 was found to have two mutations， i.e.， 126 threonine/isoleucine (T/I) to alanine (A) and 175 leucine (L) to serine (S). All 7 HBsAg+/HBV-DNA+ samples were positive for HBV DNA， among which 2 had genotype B and 3 had genotype C. ConclusionMost of the HBsAg-/HBV-DNA+ donors are positive for HBcAb， with a low concentration of HBV DNA， and genotypes B and C are the main genotypes for HBV infection.
[KEY WORDS]blood donors; hepatitis B virus; serologic tests; genetics
HBV是经输血传播疾病的病原体，乙肝表面抗原(HBsAg)是WHO认定的判断HBV感染的关键指标[1-2]。目前，我国采供血机构主要采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和核酸扩增技术(NAT)方法对献血者血液进行检测，但由于HBV的复制特点以及疫苗和抗病毒治疗的广泛应用导致HBsAg突变率高，献血者血液HBsAg检测阴性却存在低水平HBV DNA[3]。我国部分地区流行的HBV基因型主要为C型和B型，其次为D、E和A型[4-5]。但青岛地区无偿献血者的HBV基因型分布未见报道。本文研究旨在了解青岛地区HBsAg-/HBV-DNA+献血者的病毒载量和血清学状况，调查本地区HBV基因型和S基因突变情况，以期为青岛地区HBV的认知和防控提供地域性的指导性意见。
1材料与方法
1.1血液样本
根据青岛市中心血站常规血液筛查模式，共筛选出无偿献血样本39例纳入实验，样本血清量均为3 mL以上，无明显溶血和脂血。其中HBsAg-/HBV-DNA+样本32例，HBsAg+/HBV-DNA+样本7例。
1.2主要仪器
盖立复Procleix TIGRIS核酸检测系统(西班牙盖立复公司);Roche COBAS S201AmpliPre全自动核酸提取系统，Gene-Amp PCR system 9700型(美国ABI公司生产)，CTM核酸扩增检测系统，雅培Architect i2000SR化学发光分析仪，CG1-96型PCR仪(澳大利亚corbett公司)，wide mini-sub cell GT电泳仪(美国Bio-Rad公司)，Thermo LEGEND Micro 17型离心机，SORVALL Biofuge stratos 型离心机，ImageQuant350凝胶成像系统(美国GE公司生产)。
1.3主要试剂
AmpliPrep/COBAS TaqMan HBV定量检测试剂(第二代)，雅培ARCHITECT HBsAg检测试剂盒，雅培ARCHITECT HBsAg确认试剂盒(中和实验)，雅培ARCHITECT HBeAg检测试剂盒，雅培ARCHITECT anti-HBe检测试剂盒，雅培ARCHITECT anti-HBc检测试剂盒，DNA聚合酶：KOD FX(TOYOBO)，2×Taq PCR Master Mix(含染料)预混体系(天根公司)，Expand High Fidelity PCR System(Roche Applied Science)，血清/血浆病毒DNA提取试剂盒为QIAamp DNA blood mini kit (Qiagen， Hilden， Germany)。, http://www.100md.com(马维娟 杨忠思 冯秋霞 王云)
[关键词]供血者;乙型肝炎病毒;血清学试验;遗传学
[中图分类号]R446.6[文献标志码]A[文章编号]2096-5532(2019)03-0338-05
[ABSTRACT]ObjectiveTo investigate the viral load， serological characteristics， and hepatitis B virus (HBV) genotype of HBV DNA-positive donors in Qingdao， China. MethodsA total of 32 HBsAg-/HBV-DNA+ blood samples and 7 HBsAg+/HBV-DNA+ samples were selected. High-precision viral load measurement and supplementary serological test were performed， and S-region sequencing combined with specific-primer nested PCR was used to analyze HBV genotype. ResultsAmong the 32 HBsAg-/HBV-DNA+ samples， 30 (93.75%) were HBcAb+; 15 had negative HBV DNA， and 17 had positive HBV DNA; sequencing and genotyping showed that 4 samples had genotype B， among which 1 was found to have two mutations， i.e.， 126 threonine/isoleucine (T/I) to alanine (A) and 175 leucine (L) to serine (S). All 7 HBsAg+/HBV-DNA+ samples were positive for HBV DNA， among which 2 had genotype B and 3 had genotype C. ConclusionMost of the HBsAg-/HBV-DNA+ donors are positive for HBcAb， with a low concentration of HBV DNA， and genotypes B and C are the main genotypes for HBV infection.
[KEY WORDS]blood donors; hepatitis B virus; serologic tests; genetics
HBV是经输血传播疾病的病原体，乙肝表面抗原(HBsAg)是WHO认定的判断HBV感染的关键指标[1-2]。目前，我国采供血机构主要采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和核酸扩增技术(NAT)方法对献血者血液进行检测，但由于HBV的复制特点以及疫苗和抗病毒治疗的广泛应用导致HBsAg突变率高，献血者血液HBsAg检测阴性却存在低水平HBV DNA[3]。我国部分地区流行的HBV基因型主要为C型和B型，其次为D、E和A型[4-5]。但青岛地区无偿献血者的HBV基因型分布未见报道。本文研究旨在了解青岛地区HBsAg-/HBV-DNA+献血者的病毒载量和血清学状况，调查本地区HBV基因型和S基因突变情况，以期为青岛地区HBV的认知和防控提供地域性的指导性意见。
1材料与方法
1.1血液样本
根据青岛市中心血站常规血液筛查模式，共筛选出无偿献血样本39例纳入实验，样本血清量均为3 mL以上，无明显溶血和脂血。其中HBsAg-/HBV-DNA+样本32例，HBsAg+/HBV-DNA+样本7例。
1.2主要仪器
盖立复Procleix TIGRIS核酸检测系统(西班牙盖立复公司);Roche COBAS S201AmpliPre全自动核酸提取系统，Gene-Amp PCR system 9700型(美国ABI公司生产)，CTM核酸扩增检测系统，雅培Architect i2000SR化学发光分析仪，CG1-96型PCR仪(澳大利亚corbett公司)，wide mini-sub cell GT电泳仪(美国Bio-Rad公司)，Thermo LEGEND Micro 17型离心机，SORVALL Biofuge stratos 型离心机，ImageQuant350凝胶成像系统(美国GE公司生产)。
1.3主要试剂
AmpliPrep/COBAS TaqMan HBV定量检测试剂(第二代)，雅培ARCHITECT HBsAg检测试剂盒，雅培ARCHITECT HBsAg确认试剂盒(中和实验)，雅培ARCHITECT HBeAg检测试剂盒，雅培ARCHITECT anti-HBe检测试剂盒，雅培ARCHITECT anti-HBc检测试剂盒，DNA聚合酶：KOD FX(TOYOBO)，2×Taq PCR Master Mix(含染料)预混体系(天根公司)，Expand High Fidelity PCR System(Roche Applied Science)，血清/血浆病毒DNA提取试剂盒为QIAamp DNA blood mini kit (Qiagen， Hilden， Germany)。, http://www.100md.com(马维娟 杨忠思 冯秋霞 王云)
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