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编号:13531332
视网膜母细胞瘤miRNA-215和Rb1蛋白表达及意义(2)
http://www.100md.com 2019年10月1日 《青岛大学学报(医学版)》 20195
     1.2.4 BrdU检测 取对数生长期细胞制成单细胞悬液接种于96孔板,转染后培养24 h,加入20 μL BrdU标记液继续培养6 h。先加入Fix Denat使DNA变性,再加入100 μL HRP标记的抗BrdU抗体,洗涤3次后加入100 μL的TMB底物液进行显色,20 min后加1 mol/L H2SO4Y终止反应,在酶标仪上检测吸光度值,此吸光度值即BrdU值[10]。

    1.2.5 Caspase-3蛋白检测 将转染48 h后的细胞加2.5 g/L胰酶进行消化,1 000 r/min离心5 min后弃掉胰酶,以PBS洗涤细胞2次,再以2 000 r/min离心5 min后收集细胞沉淀;加入50 μL预冷的Lysis Buffer并置于冰上裂解20~30 min,随后于4 ℃以10 000 r/min离心1 min。吸取上清液,应用BCA法测定Caspase-3蛋白浓度,检测步骤严格按照Caspase-3活性检测试剂盒(北京中杉金桥生物科技有限公司)说明书进行操作。

    1.2.6 细胞凋亡率检测 取转染48 h后的细胞 ......
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