shRNA干扰URG11表达对骨肉瘤细胞恶性表型影响(2)
[KEY WORDS] osteosarcoma; up-regulated gene 11; neoplasm invasiveness; cell movement; apoptosis骨肉瘤是一种好发于青壮年和青少年的恶性骨肿瘤[1],其恶性表型如增殖、凋亡、侵袭等与细胞内异常表达基因有关[2]。上调基因11(URG11)是近年来发现的参与细胞运动、增殖等过程的基因[3],且在胃癌、肝癌等中发挥癌基因作用,下调URG11肿瘤生长和转移能力减弱[4-5]。URG11在骨肉瘤组织中呈阳性表达,且与肿瘤病人分期、转移相关,但其在骨肉瘤细胞中的作用尚不明确[6]。本实验通过干扰URG11的表达,探讨URG11对骨肉瘤细胞恶性表型的影响,为靶向URG11治疗骨肉瘤提供依据。
1 材料与方法
1.1 细胞和试剂
骨肉瘤细胞MG63购自上海研谨生物科技有限公司;polybrene购自美国Sigma公司;SYBR定量PCR试剂盒购自天根生化科技(北京)有限公司;阴性对照慢病毒和URG11短发夹RNA(shRNA)重组慢病毒由吉满生物科技(上海)有限公司构建;基质金属蛋白酶2(MMP-2)抗体、URG11抗体购自美国Abcam;裂解的半胱氨酸蛋白酶-3(Cleaved Caspase-3)抗体、基质金属蛋白酶9(MMP-9)抗体、E-钙黏蛋白(E-cadherin)抗体、裂解的半胱氨酸蛋白酶-9(Cleaved Caspase-9)抗体、波形蛋白(Vimentin)抗体购自美国Santa Cruz Biotechnology ......
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