PTPN14过表达对子宫内膜癌HEC-1A细胞增殖和凋亡影响(2)
1 材料与方法1.1 主要试剂
Opti-MEM培养基、DMEM培养基、Lipofec-tamineTM 2000以及胎牛血清均购于美国Invitrogen公司,PTPN14过表达质粒和阴性对照质粒购于北京普如汀生物技术公司,RNA提取试剂盒、逆转录试剂盒、AnnexinV-PE/7-AAD调亡试剂盒、Trizol裂解液、BCA蛋白检测试剂盒和CCK-8试剂购于南京凯基生物公司,PTPN14单克隆抗体、Yes相关蛋白(YAP蛋白)单克隆抗体、GAPDH单克隆抗体及辣根过氧化物酶标记的羊抗兔/鼠IgG二抗均购于北京中杉金桥公司,引物由上海生工生物工程股份有限公司合成。
1.2 细胞培养和构建PTPN14過表达细胞
取保存于本实验室的HEC-1A细胞冷冻管,以温水浴融化后,转移至含有适量DMEM培养基(含体积分数0.10胎牛血清)的离心管中,离心、弃上清。加入DMEM培养基重悬细胞后 ......
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