1 材料和方法

    1.1 实验材料

    BV2小胶质细胞购于中国科学院上海细胞库;DMEM高糖培养液、胎牛血清(FBS)均购于以色列Biological Industries(BI)公司;枸橼酸铁胺(FAC)、去铁胺(DFO)、LPS购于美国Sigma公司;β-actin抗体购于北京博奥森公司;Lcn2抗体购于美国R&D SYSTEM公司;HRP-IGg标记的二抗购于英国abcam公司;PVDF膜、ECL发光液均购于美国Millipore公司;其他试剂均为国产分析纯。

    1.2 实验分组及处理

    将细胞以2×104/cm2密度接种于6孔板，每孔加入2 mL细胞混悬液培养。以60%～70%细胞融合用于实验。为观察铁负载对Lcn2蛋白表达的影响，将细胞随机分为对照组、FAC组、LPS组、FAC+LPS组，FAC组、LPS组先加入细胞培养液，4 h后更换为100 μmol/L FAC或1 mg/L LPS处理24 h;FAC+LPS组先加100 μmol/L FAC预处理，4 h后更换为1 mg/L LPS处理24 h。为观察铁螯合对Lcn2的影响，将细胞随机分为对照组、DFO组、LPS组、DFO+LPS组，DFO组、LPS组先加入细胞培养液，4 h以后更换为100 μmol/L DFO或1 mg/L LPS继续处理24 h;DFO+LPS组先加入100 μmol/L DFO预处理 ......